為什么要進行微生物限度檢測方法的驗證?是為了確認所采用方法適合藥品細菌、霉菌、酵母菌數(shù)測定。照驗證過的檢查法和檢驗條件進行供試品細菌、霉菌、酵母菌數(shù)檢查能保證檢驗結(jié)果的準確、可靠。

驗證過程中你將會遇到的難點問題

1、藥品中污染的微生物處于不穩(wěn)定狀態(tài)，微生物種類具有不確定性；

2、在藥品生產(chǎn)各個環(huán)節(jié)中, 微生物污染存在著不均勻性；

3、無論是無抑菌性藥物還是抑菌性藥物都要進行微生物限度檢查，特別是污染于抑菌藥物中的微生物在一定條件下可以穩(wěn)定存在一段時間，雖然它們可能受到損傷，但未死亡，如服用至人體內(nèi), 當條件適宜時仍可生長繁殖。

4、某些藥物在試驗條件下呈現(xiàn)抑菌作用并干擾待檢菌的檢出或計數(shù), 但當服用后受到胃液及腸液的稀釋, 抑菌作用減弱或直接靜脈注射入血液, 細菌便可復蘇并繁殖, 對人體造成危害。

5、任何一種抑菌藥物均有一定的抑菌范圍，即抗菌譜。相當多的抗細菌藥物對真菌毫無作用。對所有菌類均敏感的藥物幾乎不存在。

6、細菌對抑菌藥物有適應性，耐藥性致病菌株在臨床上屢見不鮮，所以抑菌藥物內(nèi)是可能存在微生物并可對人體健康造成危害的，因此對抑菌性藥物也有必要進行微生物限度檢查，但抑菌性藥物在檢查過程中會有明顯的抑菌作用，這在很大程度上影響了微生物的檢出。

具備這些驗證條件，你就可以進行驗證試驗了

1、驗證實驗的設施、設備、器具和材料

2、驗證試驗用的稀釋劑( 液) 、沖洗液

3、具抑菌性樣品處理方法

培養(yǎng)基稀釋法：該法一般適合于抑菌作用不是很強的供試品。

化學試劑中和法

薄膜過濾法該法：常見的檢查方法，適合于可濾過的供試品，特別是無菌檢查。

離心沉淀法：常用于抑菌活性較強而又無法直接過濾的供試品，特別是不溶于水的固體中藥制劑。

驗證步驟。。。

1、根據(jù)樣品特性，制定檢驗方法和檢驗條件；

2、保證驗證試驗所用的儀器、培養(yǎng)基和試劑等均符合試驗要求；

3、按制定的方法進行試驗；

4、根據(jù)驗證結(jié)果，判斷是否符合驗證的標準。若符合，按驗證的方法和條件進行藥品的微生物限度檢查；若不符合，應重新設立驗證方案，再進行驗證，直至驗證結(jié)果符合設立的驗證標準。

Tips：驗證時，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法及要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證。驗證試驗至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

驗證用菌株？？？

細菌計數(shù)驗證用菌株：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌

霉菌、酵母菌計數(shù)驗證用菌株：白色念珠菌、黑曲霉

菌株選擇原則：代表性、普遍性、低或非致病性，標準菌株（或該藥品中常見污染菌）

菌株的要求：不得超過5代、采用適宜的方法保存、加菌量：50-100cfu

微生物學檢查是藥品常規(guī)安全性檢查的重要組成部分，驗證工作十分繁瑣，對準確檢測出藥品中微生物的真實含量具有一定的指導意義和實用價值，是藥品檢測環(huán)節(jié)*的步驟。