BUNSEN本生：雞ELISA試劑盒步驟詳解

　　BUNSEN本生雞ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟，結(jié)合通用實(shí)驗(yàn)規(guī)范與本生的操作指引，完整流程如下：

　　實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　提前將試劑盒所有試劑從2-8℃環(huán)境取出，?室溫平衡1小時(shí)?，避免低溫影響反應(yīng)活性。

　　準(zhǔn)備好待檢測(cè)的雞血清/血漿樣本，3000×g離心15分鐘去除纖維蛋白沉淀，必要時(shí)按說(shuō)明書要求做梯度預(yù)稀釋。

　　校準(zhǔn)酶標(biāo)儀、洗板機(jī)，提前配置好1×洗滌液，若濃縮洗滌液有結(jié)晶，需溫水浴溶解后再稀釋使用。

　　正式實(shí)驗(yàn)操作

　　加樣?：取出預(yù)包被的酶標(biāo)板，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔，空白孔不加任何樣本和酶試劑，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度稀釋的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入處理好的待測(cè)樣本，每孔加樣量統(tǒng)一為?100μL?，輕輕振蕩混勻。

　　第一次溫育?：封上封板膜，將酶標(biāo)板放入?37℃恒溫孵育箱?，避光溫育?60分鐘?，全程保持孵育箱溫度穩(wěn)定。

　　洗板?：棄去孔內(nèi)全部液體，每孔加入300μL配置好的1×洗滌液，浸泡1-2分鐘后棄去，重復(fù)洗板?5次?，最后一次洗板后將板倒扣在吸水紙上拍干，清除孔內(nèi)殘留液體。

　　加酶標(biāo)試劑?：除空白孔外，每孔加入?100μL酶標(biāo)抗體試劑?，輕輕振蕩混勻，再次封板。

　　第二次溫育?：同樣放入37℃孵育箱，溫育?30-60分鐘?，保證酶標(biāo)抗體與抗原-抗體復(fù)合物充分結(jié)合。

　　二次洗板?：重復(fù)上述洗板操作，同樣洗板5次后拍干，去除未結(jié)合的游離酶標(biāo)抗體。

　　顯色?：每孔先加入?50μL顯色劑A液?，再加入?50μL顯色劑B液?，輕輕混勻后，?37℃避光顯色10-15分鐘?，觀察孔內(nèi)液體逐步變?yōu)樗{(lán)色。

　　終止反應(yīng)?：每孔快速加入?50μL終止液?，此時(shí)藍(lán)色液體會(huì)立即轉(zhuǎn)為黃色，輕輕晃動(dòng)板體混勻。

　　讀數(shù)與結(jié)果分析

　　加入終止液后?15分鐘內(nèi)?，用酶標(biāo)儀在?450nm波長(zhǎng)?下讀取各孔的吸光度(OD值)。

　　以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，保證標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2≥0.99，再將待測(cè)樣本的OD值代入曲線，計(jì)算出樣本中待測(cè)物質(zhì)的實(shí)際濃度。

　　關(guān)鍵操作注意事項(xiàng)

　　加樣過(guò)程需在15分鐘內(nèi)完成，避免不同孔位反應(yīng)起始時(shí)間差過(guò)大，導(dǎo)致結(jié)果偏差。

　　洗板步驟必須充分，洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)高，直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

　　所有操作嚴(yán)格在室溫18-25℃環(huán)境下進(jìn)行，避免溫度波動(dòng)干擾酶促反應(yīng)效率。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

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