小鼠血管生長(zhǎng)素（ANG）ELISA試劑盒科研使用說明書

天正信達(dá)結(jié)合你此前關(guān)注的ELISA實(shí)驗(yàn)操作、封板膜適配等相關(guān)背景，小鼠血管生長(zhǎng)素（ANG）ELISA試劑盒的科研使用說明書如下，全程適配常規(guī)96孔板實(shí)驗(yàn)流程，保障ANG蛋白定量結(jié)果的準(zhǔn)確性：

一、產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品名稱?：小鼠血管生長(zhǎng)素（ANG）ELISA檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BS-2543

檢測(cè)原理?：采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，通過特異性包被抗體捕獲樣本中的ANG蛋白，結(jié)合酶標(biāo)二抗顯色定量

適用樣本?：小鼠血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等生物流體

檢測(cè)范圍?：常規(guī)規(guī)格為15.6 pg/mL —— 1000 pg/mL，可覆蓋小鼠生理/病理狀態(tài)下的ANG表達(dá)水平

用途限制?：僅用于體外科研實(shí)驗(yàn)，不可用于臨床診斷、人體檢測(cè)或治療相關(guān)場(chǎng)景

儲(chǔ)存條件?：未開封試劑盒2——8℃避光保存，有效期6個(gè)月，避免反復(fù)凍融

二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

設(shè)備耗材?：配備450nm濾光片的酶標(biāo)儀、單/多通道移液器及對(duì)應(yīng)槍頭、96孔板適配封板膜、Eppendorf梯度稀釋管

試劑預(yù)處理?：若濃縮洗滌液低溫析出結(jié)晶，置于37℃水浴溫和加熱至溶解，冷卻至室溫后使用

樣本預(yù)處理?：血清樣本采集后室溫靜置2小時(shí)，3000×g離心15分鐘取上清；細(xì)胞培養(yǎng)上清4℃ 1000×g離心20分鐘去除細(xì)胞碎片，避免雜質(zhì)干擾檢測(cè)結(jié)果

三、標(biāo)準(zhǔn)品配制

將ANG標(biāo)準(zhǔn)品管以10000×g離心1分鐘，使管壁凍干粉沉降至管底

加入1mL樣本稀釋液復(fù)溶，得到1000 pg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，室溫放置10分鐘充分混勻

標(biāo)記7個(gè)梯度管，每管預(yù)先加入300μL樣本稀釋液，通過倍比稀釋依次得到500、250、125、62.5、31.25、15.6 pg/mL系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品，最后一管設(shè)為空白對(duì)照

四、實(shí)驗(yàn)操作步驟

所有試劑提前從冰箱取出，平衡至室溫（20——25℃），避免低溫導(dǎo)致反應(yīng)效率偏差

設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、空白孔，每孔分別加入100μL對(duì)應(yīng)液體，空白孔加入等量樣本稀釋液

貼上適配的封板膜，37℃溫育2小時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間孵育推薦使用黑色鋁箔膜保障密封性，避免液體蒸發(fā)

棄去孔內(nèi)液體，無需洗滌，每孔加入100μL生物素化抗小鼠ANG檢測(cè)抗體工作液，貼封板膜37℃溫育1小時(shí)

棄去孔內(nèi)液體，每孔加入300μL洗滌緩沖液，浸泡1——2分鐘后棄液，重復(fù)洗板3——5次，最后一次在吸水紙上拍干孔內(nèi)殘留液體

每孔加入100μL親和素~HRP工作液，貼封板膜37℃溫育30分鐘

重復(fù)洗板5次，拍干孔內(nèi)液體，每孔加入90μL TMB底物溶液，貼封板膜37℃避光顯色10——20分鐘，待標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)清晰藍(lán)色梯度即可終止

每孔加入50μL終止液，輕晃混勻，藍(lán)色立即轉(zhuǎn)為黃色

加入終止液后15分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值

五、結(jié)果計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品ANG濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過回歸方程計(jì)算待測(cè)樣本中ANG的實(shí)際濃度，若樣本稀釋過需乘以對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)得到最終結(jié)果。

六、注意事項(xiàng)

不同批次試劑盒組分不可混用，避免交叉污染影響檢測(cè)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)全程需佩戴無粉手套，避免手上的外源蛋白、酶類污染孔板

若顯色過慢，可適當(dāng)延長(zhǎng)37℃孵育時(shí)間，但不可超過30分鐘，避免非特異性顯色升高背景值

洗板時(shí)需保證每孔液體排空，殘留洗滌液會(huì)直接影響后續(xù)酶促反應(yīng)效率，導(dǎo)致結(jié)果偏差

注：僅用于科研實(shí)驗(yàn)，不可用于診斷或人體相關(guān)檢測(cè)場(chǎng)景。

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