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純化小技巧 | MaXtar® COLL 400/700病毒應用分享

來源：百林科醫(yī)藥科技（上海）有限公司   2024年05月30日 13:19  
 

 

百林科多模式層析填料家族中
 
有這么一類特殊的填料，憑借其獨特的填料結構
 
發(fā)揮凝膠過濾和吸附層析的雙重特性
 
專為超大分子設計。
 

 

 
　　包括MaXtar® COLL 400、MaXtar® COLL 700兩種，分別適用于分子量超過400 KD和700 KD的超大分子。
 
  MaXtar® COLL 400/700產(chǎn)品簡介  
 
　　獨特的雙層結構設計，外殼是多孔的鈍化層 ，確保 400 KD或700 KD 以上的大分子不會進孔，直接走外水流穿；核心是偶聯(lián)了同時具有疏水和吸附負電荷作用基團的球形內核，最大程度結合宿主蛋白、 核酸等雜質。具有明顯優(yōu)勢：
 
　　• 以流穿模式處理400 KD 或700 KD 以上的大分子，工藝優(yōu)化更容易，更方便線性放大。
 
　　• 改良的MaXtar® 基架具有更強剛性，因此在較低的反壓下能夠實現(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率。
 
　　• 相比于傳統(tǒng)的凝膠過濾層析，擁有更大的上樣量，更高流速，生產(chǎn)效率大大提升。
 
　　• 耐受范圍廣，化學穩(wěn)定性好。
 
　　• 適用于病毒及類病毒顆粒等生物大分子分離。
 
  如何選擇MaXtar® COLL 400/700  
 
　　• MaXtar® COLL 400：如有病毒/大分子在MaXtar® COLL 700上收率不佳，有明顯吸附現(xiàn)象，可嘗試選擇更小孔徑的MaXtar® COLL 400進行優(yōu)化。
 
　　• MaXtar® COLL 700：主要適用分子量大于700KD(約30nm)的病毒/大分子。
 
  MaXtar® COLL 400/700應用案例分享  
 
案例一：MaXtar® COLL 400在VLP的應用
 

 

 
圖1：MaXtar® COLL 400純化VLP圖譜 
樣品：VLP(單體60kDa，120聚體) 
柱體積：30ml 
上樣量：300ml 
流速：7ml/min
 

表1：MaXtar® COLL 400純化結果

 
　　小結：結合層析圖譜和膠圖可見，純度有明顯提高，雜質去除明顯。
 
案例二：MaXtar® COLL 700在慢病毒中的應用
 
　　建議測試的工藝條件
 
　　樣品信息：濃縮后樣品
 
　　平衡Buffer：20 mM PB，150 mM NaCl ，pH 7.5或1×DPBS，pH 7.5
 
　　CIP Buffer：1 M NaOH，30%異丙醇

圖2：MaXtar® COLL 700純化慢病毒圖譜

 

表2：MaXtar® COLL 700純化結果

 
　　小結：回收率和雜質去除水平，均符合預期。
 
  MaXtar® COLL 400/700應用過程中的Tips  
 
　　◆ 為最大程度發(fā)揮COLL系列內部的多種配基吸雜效果，建議在緩沖液中添加100~150mM NaCl；
 
　　◆ 由于雜質與內部配基之間的高效多模式結合，需要對填料進行有效清潔，建議使用1M NaOH, 30%異丙醇。
 
　　◆ 不推薦使用檸檬酸鹽緩沖液，因為檸檬酸離子會與配基相互作用。

 

百林科多種層析填料
均可申請試用，
掃描立刻申請樣品
 

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