李曉明，王躍生，閆寒，章軍，唐曉軍

（中國中醫(yī)研究院中藥研究所，北京     100700）

 

摘要：對超微粉碎后決明子進(jìn)行大黃酚溶出量的對比研究. 結(jié)果表明：在相同提取時間和條件下水煎煮決明子藥材，大黃酚的提取率只有7.6%，而經(jīng)不同條件超微碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、57.1%、32.4%；5min水浸泡下，決明子微粉中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當(dāng).粉碎前對樣品進(jìn)行適當(dāng)干燥可提高總大黃酚的溶出量.

關(guān)鍵詞：超微粉碎；決明子；大黃酚

中圖分類號：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B     文章編號：1005-9903（2001）06-0006-03

 

超微粉碎技術(shù)在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用是近年來興起的一項新技術(shù)。經(jīng)超微粉碎后中藥材，粒度細(xì)微均勻，細(xì)胞壁多被破碎，甚至*破碎，因而比表面積增加，有利于內(nèi)容物的溶出，便于有效成分的提取。所以，采用超微粉碎技術(shù)處理中藥材是該技術(shù)在中藥領(lǐng)域中應(yīng)用的一個重要方面，因而合理應(yīng)用該技術(shù)具有較現(xiàn)實的研究意義。

決明子為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明子C.tora L.的成熟種子，為常用中藥^[1]。決明子具有驅(qū)風(fēng)散熱、清肝明目、潤腸通便功能，臨床常用于治療目赤腫痛、青盲、雀目、大便秘結(jié)等癥?，F(xiàn)代研究表明，決明子含蒽醌含量zui高，文獻(xiàn)報道約為0.25%^[2]，總蒽醌含量約為0.61%^[3]；另外還含有維生素A樣物質(zhì)、粘液、蛋白質(zhì)、谷甾醇、氨基酸及脂肪油等成分。近年來研究證明，決明子還具有降壓作用^[4]，此外，決明子還具有降壓作用^[5]及明顯改善體內(nèi)膽固醇的分布，這些均有利于預(yù)防動脈粥樣硬化^[6]等心腦血管疾病。本文擬研究經(jīng)超微粉碎后的決明子，其微粉中對所含蒽醌類化合物大黃酚溶出量的影響。

1、儀器與材料

1.1儀器 超微粉碎機：型號：SQW-6型超微粉碎機。

1.2日立7400液相色譜儀。

1.3藥材 決明子由同仁堂飲片廠提供，為C. obtusifolia L.T C.tora L.的成熟種子的混合物；決明子經(jīng)超微粉碎加工并提供粒度的測定在電腦成像粒度分析儀上進(jìn)行，各微粉樣品的粉碎條件如下：

決明子粉碎條件及粒度

                  粉碎25′        粉碎32′            粉碎40′

                200目通過率     300目通過率        300目通過率

決明子樣品      （%）/平均粒    （%）/平均粒        （%）/平均粒

                徑D₅₀（?m）     徑D₅₀（?m）        徑D₅₀（?m）

未干燥             88/8.29          65/6.71               72/6.12

80℃干燥1h         94/7.31         76/8.45                81/7.36

80℃干燥4h         99/8.18          81/8.18               881.76

 

1.       4試劑 大黃酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號:796-9302）。甲醇為色譜純，氯仿、磷酸為分析純，水為超純水。

2、方法與結(jié)果

2.       1色譜條件 色譜柱：YWGC₁₈10?m（4.6mm×250mm）,流動相：甲醇-0.1%磷酸液（90：10），流速：1ml/min，檢測波長：254nm，柱溫：30℃。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱定大黃酚對照品4.18mg，用甲醇溶解并定容于50ml棕色量瓶中，吸取0.5、1.0、2.0、4.0、5.0ml于5個10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。按色譜條件測定，進(jìn)樣量為20?l。線性范圍0.0836～0.8360?g,線性回歸方程為y＝2.69×10⁶X-7.83×10³，r＝0.9998。

2.3精密度試驗 取大黃酚對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10?l，對照品大黃酚峰面積積分值的RSD為1.4%。

2.4 穩(wěn)定性試驗 取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′），在0、2、4、6hr分別進(jìn)樣10?l，記錄峰面積，結(jié)果4次進(jìn)樣峰面積RSD為1.9%。

2.5 重復(fù)性試驗   取決明子微粉樣品溶液（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）5份。按樣品測定法測定，結(jié)果大黃酚的平均含量為1.34mg/g，RSD為1.8%。

2.6加樣回收試驗 取已知含量的決明子微粉樣品（干燥1hr、粉碎32′、提取15′）約0.10g，精密稱定，加入對照品溶液適量（0.116～0.155mg），揮干，按樣品測定法測定，平均回收率為93.5%，RSD為2.5%（n=4）。

3 供試品溶液制備與測定

3.1取決明子粉末（用小型粉碎機粉碎，過40目篩，不去皮）2g，精密稱定，用索氏提取器甲醇提取至無色提取液定容于100ml量瓶；精密吸取該提取液10ml于蒸發(fā)皿中，50℃水浴蒸干，加2ml 2.5mol/L硫酸液溶解殘渣，洗入20ml具塞試管，沸水浴上水解2h，間斷振搖提取三次（8、8、4ml），合并氯仿液，用蒸餾水洗滌二次，蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，搖勻，即得。

3.2取決明子約10g共5份，精密穩(wěn)定，分別加蒸餾水100ml于具塞三角瓶中，稱重，加熱回流15′、30′、45′、60′、90′，放冷，稱重，加蒸餾水補足重量，搖勻，過濾，濾液待用；精密吸取以上各提取液10ml，于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，置干燥器中至恒重，稱重，用于浸出物量測定。

3.3 超微粉碎前決明子中總大黃酚含量及提取率的測定   吸取上述五組提取液2ml至大試管中，加5mol/L硫酸液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結(jié)果見表1：

表1不同提取時間對決明子總提取物含量和總大黃酚含量的影響

 

提取時間       總提取物含量         總大黃酚含量      提取率

（min）           （%）               （mg/g）         （%）

15               10                    0.18            7.6

30               14                    0.62           26.1

45               15                    0.78           32.8

60               19                    1.02           42.9

90               22                    1.69           71.0

索氏提?。?h）    -                     2.38           100

3.4超微粉碎后決明子中總大黃酚含量測定   取決明子各微粉組之微粉約1g共4份，置具塞三角瓶內(nèi)，加蒸餾水50ml，在80℃水浴上溫浸5、15、30、45min；取出，放冷，離心，吸取上清液2ml置于20ml具塞大試管，加5mol/L硫酸溶液2ml，其余操作按3.1制備樣品液，按色譜條件測定。結(jié)果見表2、表3：

表2 不同溫度對提取決明子微粉中大黃酚含量的影響（干燥4h，粉碎25′）

溫度（℃）       60       70        80        90

含量（mg/g）    1.33     1.34       1.58       1.46

 

表3 不同時間對提取決明子微粉中總大黃酚含量的影響（mg/g）（80℃）

 

微粉組             提取5min/      提取15min/    提取30min/    提取45min/

                   提取率          提取率        提取率         提取率

       粉碎25′ 0.42/17.6      0.46/19.3     0.50/21.0     0.48/20.2

未干燥 粉碎32′ 0.42/17.6      0.77/32.4     0.72/30.3     0.85/35.7

粉碎40′ 0.65/27.3      0.70/29.4     0.74/31.1     0.55/23.1

粉碎25′ 1.60/67.2      1.69/71.0     1.59/66.8     1.56/65.5

干燥1h 粉碎32′ 1.54/64.7      1.36/57.1     1.36/57.1     1.23/51.7

粉碎40′ 1.05/44.1      0.87/36.6     0.92/38.7     0.73/30.7

粉碎25′ 1.73/72.7      1.48/62.2     1.59/66.8     1.66/69.7

干燥4h 粉碎32′ 1.60/67.2      1.66/69.7     1.96/82.4     1.82/76.5

粉碎40′ 0.93/39.1      0.90/37.8     1.00/42.0     1.09/45.8

4討論

4.1粉碎條件與粒度的相關(guān)性 從“決明子粉碎條件及粒度”表中可以看出：①物料的干燥程度或含水率對粉碎細(xì)度有直接的影響，即含水率越低有助于粉碎成細(xì)顆粒；②當(dāng)含水率相同時，粉碎時間越長粉碎的粒度越細(xì)小，但粉碎到一定的時間點時，再延長粉碎時間，則對粒度的影響變小，提示：對決明子的粉碎時，存在*粉碎條件的確定問題。

4.2粉碎前后決明子總大黃酚提取率的比較 ①從表1中可以看出，未粉碎決明子在提取條件相同的情況下，提取時間越長，提取率越高，煮提3次，每次30min時，提取率可達(dá)到71.0%。②從表3中可以看出，超微粉碎后，提取時間的延長對提取率影響不大，提示：經(jīng)超微粉碎后，細(xì)胞壁被破碎，有助于總大黃酚的溶出，且溶出速度加快，提取5min時，即可達(dá)到或接近濃度平衡；實驗中還發(fā)現(xiàn)，隨著提取時間的延長，溶液的粘稠度也不斷增加。兩者比較：水煎煮決明子藥材（提取15min），大黃酚的提取率只有7.6%（以索氏提取器為100%計），而經(jīng)不同條件超微粉碎后的各組決明子的提取率分別提高到69.7%、

57.1%、32.4%；如按提取總大黃酚含量不變比較，在80℃、5min水浸泡下，決明子微粉（干燥4h、粉碎32min）中總大黃酚含量與藥材水煎煮90min的含量相當(dāng)。③從表3中可以看出：用相同的提取時間下，粒度越細(xì)，溶出量越高，如粉碎25min、提取5min組，未干燥溶出量為0.42，干燥1h為1.60，而干燥4h為1.73。但從延長粉碎時間、增加細(xì)度的樣品組看，細(xì)度越小，溶出量反而下降，尤其是粉碎40min組，溶出量下降明顯；而未干燥組，由于粉碎時間延長，對粒度影響不大，因此對溶出量的減少不明顯，提示：粉碎時間的延長，對總大黃酚類成分有一定影響，說明，從有效成分的溶出和保留來看，也存在*粉碎條件的確定問題。可見，超微粉碎技術(shù)應(yīng)用于中藥的粉碎時，存在一定的應(yīng)用規(guī)律和應(yīng)用條件等科學(xué)問題，并不是一個簡單的粉碎過程，應(yīng)引起足夠的重視。

 在本實驗中，將決明子粉碎去皮，其總大黃酚含量增加近74%，提示蒽醌類物質(zhì)主要存在于果實中，皮中含量較少；游離的大黃酚僅占總大黃酚含量的1.47%。此外，有關(guān)超微粉碎后對決明子中蒽醌類成分穩(wěn)定性的研究及相關(guān)藥效學(xué)研究正在進(jìn)行中。

參考文獻(xiàn)：

[1]中華人民共和國藥典一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社.2000.12.

[2]張啟偉，陰健，張俊，等.生、炒決明子及其煎劑中部分活性成分的比較[J].中草藥，1996，27（2）：79.

[3]王慕鄒，梁彬，沙世炎，等.植物藥中一些主要成分測定方法的研究Ⅲ.蒽醌的測定方法[J].藥學(xué)學(xué)報1963，10（12）：720.

[4]曾大富，陳建民，連文沃，等.中國決明子屬研究進(jìn)展[J].川藥校刊，1991，（4）：35.

[5]劉菊秀，苗戌，狄俊英，等.決明子降壓作用的實驗研究[J].天津中醫(yī)，1990，（5）：37.

[6]陳衛(wèi)星，刁國俊，蔣文娟，等.決明子對高膽固醇血癥小鼠模型的影響[J].中草藥，1991，22（2）：72.