有沒(méi)有ELISA結(jié)果判讀的常見(jiàn)問(wèn)題解答

　　ELISA結(jié)果判讀常見(jiàn)問(wèn)題解答，本生BUNSEN技術(shù)老師驗(yàn)后的數(shù)據(jù)困惑總結(jié)：

　　一、基礎(chǔ)判定類問(wèn)題

　　陽(yáng)性/陰性/不確定結(jié)果分別代表什么??

　　陽(yáng)性：樣本OD值高于試劑盒設(shè)定的Cut-off臨界值，提示檢出目標(biāo)物;陰性：OD值低于臨界值，未檢出目標(biāo)物;不確定：OD值落在臨界值附近的灰區(qū)，無(wú)法直接判定，需重復(fù)檢測(cè)或用其他方法驗(yàn)證。

　　樣本OD值低于空白值，是實(shí)驗(yàn)失敗了嗎??

　　不一定。少量樣本出現(xiàn)該情況多是操作誤差，增加重復(fù)孔即可;大量樣本出現(xiàn)則大概率是基質(zhì)效應(yīng)，可通過(guò)稀釋樣本、用含動(dòng)物血清的PBS配制校正曲線來(lái)修正。

　　二、標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)問(wèn)題

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線R2達(dá)不到0.99，還能用嗎??

　　不建議直接使用。R2低于0.98時(shí)，所有樣本的濃度計(jì)算誤差會(huì)明顯增大，優(yōu)先排查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度是否出錯(cuò)、移液器是否校準(zhǔn)、復(fù)孔是否有跳點(diǎn)，修正后重新擬合曲線。

　　高濃度標(biāo)準(zhǔn)品OD值反而比低濃度低，是什么原因??

　　這是典型的?鉤狀效應(yīng)，高濃度抗原占據(jù)所有抗體結(jié)合位點(diǎn)，無(wú)法形成有效夾心復(fù)合物，信號(hào)反而下降，將高濃度樣本梯度稀釋后重新檢測(cè)即可恢復(fù)正常。

　　三、異常結(jié)果類問(wèn)題

　　明明是陰性樣本，卻測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果(假陽(yáng)性)，常見(jiàn)原因有哪些??

　　多由交叉反應(yīng)、樣本溶血/脂血、洗滌不凈、封閉不充分導(dǎo)致，可通過(guò)選擇高特異性抗體、離心去除樣本雜質(zhì)、增加洗滌次數(shù)來(lái)降低假陽(yáng)性概率。

　　預(yù)期陽(yáng)性的樣本測(cè)出陰性(假陰性)，該怎么排查??

　　優(yōu)先檢查樣本中目標(biāo)物濃度是否低于檢測(cè)限、孵育時(shí)間/溫度是否不達(dá)標(biāo)、樣本是否反復(fù)凍融破壞了抗原結(jié)構(gòu)，可嘗試濃縮樣本、延長(zhǎng)孵育時(shí)間重新檢測(cè)。

　　整板都出現(xiàn)高背景、全板發(fā)黃，是什么問(wèn)題??

　　大概率是洗板不充分、底物孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、封閉步驟失效，可調(diào)整為每步洗滌5次、底物避光孵育10-15分鐘后及時(shí)終止，更換更合適的封閉劑重新實(shí)驗(yàn)。

　　四、實(shí)操注意事項(xiàng)

　　不同試劑盒的Cut-off值、參考范圍存在差異，判讀時(shí)必須以對(duì)應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

　　ELISA檢測(cè)僅作為初篩手段，陽(yáng)性結(jié)果需通過(guò)Western Blot、hesuan 檢測(cè)等方法做最終確認(rèn)。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

　　本生BUNSEN一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。