齊一生物科技（上海）有限公司
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土壤脲酶（Solid-Urease，S-UE）測(cè)定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
測(cè)定意義：
S-UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、
全氮和*氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。
測(cè)定原理：
利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水解尿素產(chǎn)生的 NH3-N。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯（不允許快
遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存； （自備）
試劑二：粉劑×1 瓶，臨用前加入 20mL 蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑 4
℃保存；
試劑三：液體65mL×1瓶，4℃保存；
試劑四 A 液：液體 1mL×1 瓶，4℃保存；試劑四 B 液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；臨用前
將 A液倒入 B液中混合，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；
試劑五：液體5mL×1瓶，4℃保存；
測(cè)定步驟：
1 、培養(yǎng)
測(cè)定管 對(duì)照管
風(fēng)干土樣(g) 0.25 0.25
試劑一（μL） 125 125
振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，室溫放置15min
試劑二（μL） 625
蒸餾水（μL） 625
試劑三（μL） 1250 1250
混勻，放入 37℃水浴培養(yǎng) 24h后，10000g常溫離心 10min，取上清液。
2、將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋 10倍（取0.1mL上清液，加入 0.9mL蒸餾水）。
3、測(cè)氨量
測(cè)定管 對(duì)照管
稀釋后的上清液（μL） 400 400
試劑四（μL） 80 80
試劑五（μL） 60 60
充分混勻，室溫放置20min
蒸餾水（μL） 460 460
混勻， 578nm處蒸餾水調(diào)零，測(cè) A值，ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
脲酶活力計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 0.0915x +0.0373；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每 g土樣中產(chǎn)生 1μg NH3-N 定義為一個(gè)酶活力單位。
脲酶活力（U /g 土樣）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷W÷T =874×(ΔA -0.0373)
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，1d； V反總：反應(yīng)體系總體積：2mL；W：樣本質(zhì)量，0.25g。
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