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目前，核酸篩檢系統(tǒng)（Nucleic Acids Testing，NAT）已廣泛用于血制品常規(guī)病原體（乙肝、丙肝、艾滋、梅毒）的核酸檢測，極大降低了相關疾病的輸血傳播。但是，在輸血感染性風險中，血小板的細菌污染及相關敗血癥性輸血反應仍是棘手的問題。將核酸篩檢技術用于細菌污染檢測還有不少困難，包括：1、細菌污染不像特定病原體，沒有統(tǒng)一的標準品；2、缺少合適的內參質控排除假陽性或假陰性結果；3、核酸擴增聚合酶（Taq）大多是細菌來源，帶有痕量的細菌核酸成分。
近期，中國科學院蘇州生物醫(yī)學工程技術研究所血液免疫學研究中心提出一種雙重熒光定量PCR方法可提高細菌污染檢測的可靠性：設計一條人工核酸序列（IRC）作為內參，其特點是IRC與靶基因共用同一對引物進行擴增，分別用不同熒光探針進行檢測。通過控制IRC分子數達到陽性檢出限，以其Ct(i)值作為閾值，只有樣本檢測的Ct(s)值小于或等于Ct(i)時，檢測結果才可認定為陽性。一種雙樣本混合的t測驗（two samples pooled t-test）統(tǒng)計學方法可用于幫助判斷兩個Ct值的大小。IRC還可以包裝成噬菌體，用于監(jiān)控核酸樣本提取過程。
此外，該雙重熒光定量PCR方法可通過分別檢測細菌的DNA（脫氧核糖核酸）與RNA（核糖核酸），計算不同Ct的比值，能判斷細菌是處于生長繁殖期或者已經是死菌，從而幫助判斷血制品滅活的效果。該方法不僅能用于血制品細菌污染檢測，理論上也能開發(fā)成其他外源基因核酸定量檢測的有效方法。
圖-1、IRC雙重熒光定量PCR原理圖
圖-2、IRC雙重熒光定量PCR性能測試
journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0134743
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