齊一生物科技（上海）有限公司
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JC-1檢測凋亡細(xì)胞線粒體膜電位改變
BD™ MitoScreen (JC-1)線粒體膜電位檢測試劑盒（551302）組分 描述
JC-1(染料) 4瓶，每瓶用于25個(gè)樣本。凍干粉，使用前稀釋至儲(chǔ)存液（Stock Solution），使用時(shí)稀釋至工作液（Working Solution）
10 x Assay Buffer 60ml，足以用于100個(gè)樣本。使用前稀釋至1X
試劑準(zhǔn)備：
A.10× Assay Buffer的稀釋（Assay Buffer作為實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)液用于清洗細(xì)胞） ：
a) 使用前將10× Assay Buffer置于37°C水浴箱中至溶解。
b) 用雙蒸水1：10稀釋10× Assay Buffer，攪拌5分鐘。
c) 使用前將1× Assay Buffer 在37°C預(yù)熱。
JC-1儲(chǔ)存液的配制（一瓶）：
a) 室溫下每瓶用125μl DMSO 稀釋JC-1凍干粉。反復(fù)倒置混勻小瓶使JC-1充分溶解。
b) 儲(chǔ)存液應(yīng)立即稀釋為工作液或分裝成小份（避光操作），-20°C保存（可長達(dá)6個(gè)月）。
c) 避免反復(fù)凍融JC-1儲(chǔ)存液。
JC-1工作液的配制：
a) 37°C預(yù)熱1× Assay Buffer。
b) 用1× Assay Buffer 1：100稀釋 JC-1儲(chǔ)存液至JC-1工作液。例如將125μl的JC-1儲(chǔ)存液加入 12.375ml 預(yù)熱的1× Assay Buffer中。 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，每個(gè)樣本（<106細(xì)胞）需要0.5ml的JC-1工 作液。
c) 輕柔混勻JC-1工作液待用。（混勻后可能會(huì)出現(xiàn)少許JC-1聚集微粒，但并不影響流式檢測。也可在室溫13,000g離心3分鐘或 1，000g 離心15分鐘去除JC-1團(tuán)絮。）
實(shí)驗(yàn)操作：
制備1x106 /ml的細(xì)胞懸液， 濃度不宜過高，因?yàn)槌^該濃度容易造成細(xì)胞的凋亡。
誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行凋亡的處理，同時(shí)保留一份未經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞作為對(duì)照。
凋亡處理結(jié)束后，每個(gè)無菌的15ml聚苯乙烯離心管中加入1ml細(xì)胞懸液，室溫下，400×g ，離心5分 鐘，棄上清。
每管加入0.5 ml 新鮮配制的JC-1工作液，充分混勻后置于37°C的CO2培養(yǎng)箱，孵育10-15分鐘。
按以下步驟洗滌細(xì)胞兩次：
*次：每管加體積為2 ml的 1× Assay Buffer，輕輕懸浮細(xì)胞，振蕩或用槍頭使細(xì)胞分散，以免細(xì) 胞聚集成塊。400×g ，室溫離心5分鐘，棄上清。
第二次：每管加體積為1ml的 1× Assay Buffer，輕輕懸浮細(xì)胞，振蕩或用槍頭使細(xì)胞分散，以免細(xì) 胞聚集成塊。400×g ，室溫離心5分鐘，棄上清。
每管加體積為0.5 ml的 1× Assay Buffer，輕輕懸浮細(xì)胞，上機(jī)檢測。
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