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主營產(chǎn)品: elisa試劑盒說明書,elisa實(shí)驗(yàn),elisa原理

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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

免疫化學(xué)產(chǎn)品

血清

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細(xì)胞

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elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟

2012-9-17 

  elisa試劑盒檢測樣本的原理和步驟
  
  表達(dá)產(chǎn)物的檢測
  
  如果采集的實(shí)質(zhì)器官則要求:
  
  1、器官實(shí)質(zhì)不能太小
  
  2、以采集實(shí)質(zhì)性病灶區(qū)為佳:如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
  
  3、同一病例裝入同一容器,并做好標(biāo)記
  
  4、應(yīng)在0-8℃的低溫儲存和運(yùn)輸
  
  5、實(shí)質(zhì)性器官的處理:
  
  5.1、取實(shí)質(zhì)性器官約0.5mg左右,充分剪碎或研磨
  
  5.2、加入約500ul的PBS/生理鹽水,充分混勻
  
  5.3、離心5000rmpx10min,去上清
  
  5.4、-20℃保存,作為待檢標(biāo)本(切勿反復(fù)凍融)
  
  二.體液(常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
  
  1、血液包括血漿和血清,它們的主要區(qū)別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
  
  1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />  
  1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時后,800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />  
  2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集,因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時間時空腹采集;
  
  3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般隔夜尿不采集;
  
  4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmpx5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />  
  三.糞便以及天然孔排泄物:采集后一般現(xiàn)用PBS/生理鹽水溶解,充分混勻,800-1000rmpx5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />  
  四.活檢組織一般進(jìn)行穿刺檢測,zui常見的就是肝活檢,像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進(jìn)行活檢簡單方便、準(zhǔn)確。
  
  真核表達(dá)產(chǎn)物
  
  1、細(xì)胞上清(分泌性蛋白)
  
  1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
  
  1.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmpx10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmpx10min,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
  
  2、細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)
  
  2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001MPBS(pH7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管,500-800rmpx10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中,DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
  
  2.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmpx10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01MPBS(pH7.4)重懸,500-800rmpx10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中,DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmpx10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測,如有需要可進(jìn)行透析或純化處理。


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