微生物限度檢查法 -檢驗(yàn)量

檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、ml 或c㎡）。除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為

10g 或10ml；膜劑為100c㎡；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。要求檢查沙門菌的

供試品，其檢驗(yàn)量應(yīng)增加20g 或20ml（其中10g 用于陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)）。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2 個(gè)以上

zui小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4 片。一般應(yīng)隨機(jī)抽取不

少于檢驗(yàn)用量（兩個(gè)以上zui小包裝單位）的3 倍量供試品。供試液的制備根據(jù)供試品的理化特

性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時(shí)，應(yīng)均勻加熱，且溫度

不應(yīng)超過(guò)45℃。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過(guò)1 小時(shí)。除另有規(guī)定外，常用的

供試液制備方法如下。

1.液體供試品

取供試品10ml，加pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1∶10 的供試液。油

劑可加入適量的無(wú)菌聚山梨酯80 使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液

作為供試液。

2.固體、半固體或黏稠性供試品

取供試品10g，加pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，用勻漿儀或其他適宜的方法，混

勻，作為1∶10 的供試液。必要時(shí)加適量的無(wú)菌聚山梨酯80，并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分

散均勻。

3.需用特殊供試液制備方法的供試品

(1)非水溶性供試品

方法1 取供試品5g（或5ml），加至含溶化的（溫度不超過(guò)45℃）5g 司盤80、3g 單硬脂酸甘油

酯、10g 聚山梨酯80 無(wú)菌混合物的燒杯中，用無(wú)菌玻棒攪拌成團(tuán)后，慢慢加入45℃的pH7.0 無(wú)

菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1∶20 的供試液。

方法2 取供試品10g，加至含20ml 無(wú)菌十四烷酸異丙酯和無(wú)菌玻璃珠的適宜容器中，必要時(shí)可

增加十四烷酸異丙酯的用量，充分振搖，使供試品溶解。然后加入45℃的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋

白胨緩沖液100ml，振搖5～10 分鐘，萃取，靜置使油水明顯分層，取其水層作為1∶10 的供試

液。

(2)膜劑供試品

取供試品100c㎡，剪碎，加100ml 的pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（必要時(shí)可增加稀釋

液），浸泡，振搖，作為1∶10 的供試液。

(3)腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品

取供試品10g，加pH6.8 無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（用于腸溶制劑）或pH7.6 無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（用于

結(jié)腸溶制劑）至100ml，置45℃水浴中，振搖，使溶解，作為1∶10 的供試液。

(4)氣霧劑、噴霧劑供試品

取規(guī)定量供試品，置冰凍室冷凍約1 小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無(wú)菌鋼錐在該

部位鉆一小孔，放至室溫，并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩全部釋出。用無(wú)菌注射器吸出全部

藥液，加至適量的pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（若含非水溶性成分，加適量的無(wú)菌聚山梨

酯80）中，混勻，取相當(dāng)于10g或10ml 的供試品，再稀釋成1∶10 的供試液。

(5)貼膏劑供試品

取規(guī)定量供試品，去掉貼膏劑的保護(hù)層，放置在無(wú)菌玻璃或塑料片上，粘貼面朝上。用適宜的

無(wú)菌多孔材料（如無(wú)菌紗布）覆蓋貼劑的粘貼面以避免貼劑粘貼在一起。然后將其置于適宜體

積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀釋劑中，用力振蕩至少30 分鐘，制成供

試液。貼膏劑也可以其他適宜的方法制備成供試液。

(6)具抑菌活性的供試品

當(dāng)供試品有抑菌活性時(shí)，采用下列方法進(jìn)行處理，以消除供試液的抑菌活性后，再依法檢查。

常用的方法如下。

①培養(yǎng)基稀釋法 取規(guī)定量的供試液，至較大量的培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品含量減少，

至不含抑菌作用。測(cè)定細(xì)菌、霉菌及酵母菌的菌數(shù)時(shí)，取同稀釋級(jí)的供試液2ml，每1ml 供試液

可等量分注多個(gè)平皿，傾注瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每1ml 供試液所注的平皿

中生長(zhǎng)的菌數(shù)之和即為1ml的菌落數(shù)，計(jì)算每1ml 供試液的平均菌落數(shù)，按平皿法計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告

菌數(shù)；控制菌檢查時(shí)，可加大增菌培養(yǎng)基的用量。

② 離心沉淀法 取一定量的供試液， 500 轉(zhuǎn)/分離心3 分鐘，取全部上清液混合，用于細(xì)菌檢

查。

③薄膜過(guò)濾法 見(jiàn)細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)項(xiàng)下的“薄膜過(guò)濾法”。

④中和法 凡含汞、砷或防腐劑等具有抑菌作用的供試品，可用適宜的中和劑或滅活劑消除其抑

菌成分。中和劑或滅活劑可加在所用的稀釋液或培養(yǎng)基中。