破解 GLP?1 多肽吸附難題

時間：2026/9/18

多肽是由多個氨基酸通過肽鍵連接形成的化合物。一般指2-100個氨基酸縮合而成，分子量大致200-10000 Da。以司美格魯肽和替爾泊肽為代表的長鏈多肽，作為新一代治療糖尿病的藥物，不僅可以有效刺激體內(nèi)胰島素的釋放，控制血糖水平，還可以抑制腸胃蠕動，控制食欲。它們在降糖，減重等方面表現(xiàn)出了良好的臨床優(yōu)勢。這類GLP-1類藥物其口服利用度非常低，需要高靈敏度高選擇性的分析方法，通常采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行定性定量檢測。而由于其分子量大、多條肽鍵、含大量疏水氨基酸并同時帶電荷，極易吸附殘留。LC-MS上表現(xiàn)為進空白溶劑仍出峰、交叉污染和峰保留時間逐步漂移等現(xiàn)象。針對多肽類藥物在色譜端殘留大的問題，科諾美現(xiàn)推出Frontier生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)（Frontier Bio Inert LC），該系統(tǒng)與質(zhì)譜儀聯(lián)用，可以大大減少乃至消除非特異性吸附，有效提高檢測精準(zhǔn)度；無需鈍化處理系統(tǒng)，提高儀器使用效率，為多肽類藥物測定提供優(yōu)質(zhì)解決方案。

實驗部分

儀器設(shè)備：Frontier Bio Inert LC 聯(lián)用 SCIEX 5500+ MS/MS

色譜條件

液相方法：

色譜柱：ACQUITY UPLC Peptide BEH C18 2.1*100 mm 1.7μm

流動相：A：水（含0.1%甲酸）；B：乙腈（含0.1%甲酸）

梯度洗脫：0.01-0.5min，30%B；0.5-3.0min，30%B-65%B；3.0-3.5min，65%B；3.5-4.0min，65%B-98%B；4.0-5.5min，98%B。

流速：0.3mL/min

柱溫：65℃

進樣量：5μL

質(zhì)譜方法：

數(shù)據(jù)采集方法：MRM（多反應(yīng)監(jiān)測）

離子源：ESI正模式

氣簾氣CUR：35psi IS電壓：5500V

源溫度TEM：450℃ 霧化氣GS1：60psi

輔助氣GS2：60psi 碰撞氣CAD：high

表1 Semaglutide和Tirzepatide的MRM離子對信息

溶液配置

混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別稱取適量司美格魯肽和替爾泊肽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用50%乙腈水配制成1mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：將上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液用50%乙腈水稀釋成濃度為1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

實驗結(jié)果

Carryover測試結(jié)果對比

按照空白-500ng/mL-空白1-空白2的進樣順序編輯序列，運行結(jié)束后根據(jù)目標(biāo)峰的峰面積計算500ng/mL濃度之后的第一針和第二針空白的殘留水平，結(jié)果如表2所示。生物惰性儀器500ng/mL后空白1殘留%比普通Frontier殘留減少約57%。

表2 普通Frontier和生物惰性Frontier Bio Inert 儀器殘留對比表（以峰面積計算）

Frontier Bio inert LC系統(tǒng)新增多種自動進樣器清洗方式，更適配易殘留的多肽檢測，通過增加針清洗和閥清洗等方式殘留可降至0.1%以內(nèi)。

表3 生物惰性Frontier Bio Inert 不同進樣器清洗程序儀器殘留對比表（以峰面積計算）

圖 1 線性最高點濃度500ng/mL司美格魯肽和替爾泊肽總離子流圖（TIC）

圖 2 司美格魯肽500ng/mL以及空白1殘留疊加圖

圖 3 替爾泊肽500ng/mL以及空白1殘留疊加圖

線性

將司美格魯肽和替爾泊肽混合標(biāo)準(zhǔn)工作液1.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，50.0ng/mL，100.0ng/mL，200ng/mL，500ng/mL分別進樣分析。司美格魯肽和替爾泊肽線性結(jié)果如圖4所示，在1.0ng/mL~500ng/mL范圍內(nèi)線性良好，r2均大于0.999。

圖4 Semaglutide和Tirzepatide的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

重現(xiàn)性

將100ng/mL的樣品連續(xù)進樣6次進行重復(fù)性考察。保留時間重復(fù)性在0.07%-0.09%之間，峰面積重復(fù)性在1.24%-1.80%之間，結(jié)果如圖5和圖6所示。

圖5 司美格魯肽100ng/mL連續(xù)6針重復(fù)性結(jié)果表

圖6 替爾泊肽100ng/mL連續(xù)6針重復(fù)性結(jié)果表

結(jié)論

本方案采用科諾美Frontier生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)（Frontier Bio Inert LC），該系統(tǒng)與質(zhì)譜儀聯(lián)用，采用新的自動進樣器清洗方式，可以有效減少乃至消除非特異性吸附，線性最高點500ng/mL后空白殘留在0.1%以內(nèi)，在濃度范圍1ng/mL-500ng/mL內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)大于0.999，重復(fù)性好，滿足多肽類藥物的測定要求。

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