酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA試劑盒使用原理
ELISA試劑盒的原理是?抗原與抗體的特異性結合+酶催化顯色放大?,通過顏色深淺定量檢測目標物的含量。
基礎流程
先將已知抗原/抗體固定在微孔板等固相載體表面,加入待測樣本后,樣本中的對應抗體/抗原會與固相載體上的物質(zhì)發(fā)生特異性結合,再加入酶標記的抗體,形成免疫復合物。
信號放大與定量
酶標記物中的酶可催化底物發(fā)生顯色反應,比如TMB底物會從無色變?yōu)樗{色,加終止液后轉為穩(wěn)定黃色,顏色深淺與目標物濃度正相關,通過酶標儀讀取450nm波長下的吸光度值,結合標準曲線就能算出待測物的準確含量。
不同檢測模式適配場景
雙抗體夾心法:用兩個抗體“夾住"大分子抗原,適合檢測蛋白質(zhì)、抗原等,靈敏度和特異性高。
競爭法:適配激素、藥物等小分子物質(zhì),樣本中目標物越多,最終顯色越淺。
間接法:多用于抗體檢測,比如疫苗效價測定,通過酶標二抗放大信號。
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