科研白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒操作步驟

　　結(jié)合科研用細(xì)胞因子ELISA檢測(cè)相關(guān)信息，以下是科研用白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：

　　倉(cāng)鼠白細(xì)胞介素6(IL-6)ELISA試劑盒 96T/48T

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　　一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　提前1小時(shí)將試劑盒和待測(cè)樣本從冰箱取出，室溫平衡至25-28℃，避免低溫影響反應(yīng)活性。

　　按說(shuō)明書(shū)將20×濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20比例稀釋?zhuān)魸饪s液有結(jié)晶，室溫溶解后再稀釋使用。

　　提前準(zhǔn)備好450nm酶標(biāo)儀、不同量程高精度移液器、37℃恒溫箱等器材。

　　二、正式操作流程

　　板條準(zhǔn)備?：計(jì)算所需微孔板條數(shù)，取出后剩余板條密封放回4℃保存，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔。

　　加樣?：標(biāo)準(zhǔn)品孔加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔先加40μL樣本稀釋液，再加10μL待測(cè)樣本，空白孔加50μL樣本稀釋液。

　　加酶孵育?：每孔加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，封板膜密封后，37℃恒溫箱溫育60分鐘。

　　洗板?：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)洗板5次，最后在吸水紙上充分拍干。

　　顯色?：每孔依次加入底物A、底物B各50μL，輕輕混勻后37℃避光孵育15分鐘。

　　終止與讀數(shù)?：每孔加入50μL終止液，待藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色后，15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD值。

　　三、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，通過(guò)樣本的OD值在曲線(xiàn)上查出對(duì)應(yīng)濃度，再乘以樣本的稀釋倍數(shù)，即可得到IL-6的實(shí)際濃度。

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