高通量細胞計數(shù)儀可以提供快速、簡便和準(zhǔn)確的細胞計數(shù)和存活率計數(shù)，無需使用血球計數(shù)器，克服了手工計數(shù)的繁瑣和主觀性，節(jié)約實驗時間，并能減少主觀判斷，避免產(chǎn)生錯誤。原理：臺盼藍排斥法。正常的活細胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內(nèi)；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。自動細胞計數(shù)儀應(yīng)用臺盼藍染色法，再結(jié)合CCD成像，快速準(zhǔn)確完成細胞計數(shù)和存活率計數(shù)。

　　高通量細胞計數(shù)儀是如何工作的？

　　開始使用流式細胞儀，準(zhǔn)備要分析的樣品。從細胞培養(yǎng)物，血液或分解的組織中獲得的細胞應(yīng)制成懸浮液。將該細胞懸浮液分成數(shù)個試管進行染色，保留未染色細胞作為對照。通過添加標(biāo)記有熒光探針的抗體或染色細胞成分的染料對其他細胞樣品染色。分析細胞內(nèi)蛋白質(zhì)時，先將細胞固定(使用福爾馬林緩沖液)并進行透化(使用透化劑)，以使抗體和染料進入細胞。細胞與抗體或染料孵育后，將細胞在緩沖液中洗滌，然后重懸在基于鹽的緩沖液中進行分析。然后將準(zhǔn)備好的樣品引入流式細胞儀。

　　三個主要輸出測量值是前向散射，側(cè)向散射和熒光信號。激光的可見光會反射出每個流通池，從而提供流通的尺寸和形狀特征。前向散射的前向散射(FSC)是從正方向來的散射而反射細胞的大小。沿著激光路徑測量散射，每個單元將使光圍繞單元的側(cè)面彎曲，從而引起衍射。因此，F(xiàn)SC的強度反映了細胞的直徑。

　　側(cè)面散射。該側(cè)向散射(SSC)是在90度激光束下測量的散射，反映了細胞的粒度或復(fù)雜性。細胞中的結(jié)構(gòu)將改變進入細胞的光波的方向，從而導(dǎo)致特定的細胞結(jié)構(gòu)(例如顆粒和細胞核)折射光。SSC越強，折射越大，則預(yù)期單元中的粒度就越大。