寡核苷酸藥物（Oligonucleotide Drugs）是一類以寡核苷酸為基礎的治療藥物，主要用于調節(jié)基因表達或干擾與疾病相關的RNA分子功能。其中，反義寡核苷酸（ASO）作為技術成熟、應用廣泛的核酸藥物，全球年銷售額就達到約32億美元，成為基因治療領域的重要支柱。因此，對寡核苷酸進行高靈敏度和穩(wěn)定的定性定量分析變得越來越重要。LC-MS/MS由于其優(yōu)異的選擇性和高靈敏度可為寡核苷酸定量分析提供有效幫助。然而ASO硫代骨架是強負電，大分子易金屬螯合，容易產(chǎn)生強非特異性吸附，導致LC-MS/MS殘留大，高濃度進樣后，后續(xù)空白持續(xù)出峰。針對寡核苷酸藥物在色譜端殘留大的問題，科諾美推出Frontier生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)（Frontier Bio Inert LC），該系統(tǒng)與質譜儀聯(lián)用，可以大大減少乃至消除非特異性吸附，有效提高檢測精準度；無需鈍化處理系統(tǒng)，提高儀器使用效率，為寡核苷酸藥物測定提供優(yōu)質解決方案。
液相方法：
色譜柱：KINETEX 2.6μm EVO C18 100? 50*2.1mm
流動相：A：水(0.15%DIEA+0.7%HFIP)；
流動相：B：乙腈(0.15%DIEA+0.7%HFIP)
梯度洗脫：0.01-3.0min，5%B-30%B；3.0-5.0min，30%B-100%B；5.0-5.9min，100%B。
流速：0.3mL/min
柱溫：40℃
進樣量：5μL
質譜方法：
數(shù)據(jù)采集方法：MRM（多反應監(jiān)測）
離子源：ESI負模式
氣簾氣CUR：35psi IS電壓：5500V
源溫度TEM：550℃ 霧化氣GS1：50psi
輔助氣GS2：50psi 碰撞氣CAD：high
表1 寡核苷酸（ASO）的MRM離子對信息
按照空白-500ng/mL-空白1-空白2的進樣順序編輯序列，運行結束后根據(jù)目標峰的峰面積計算500ng/mL濃度之后的第一針和第二針空白的殘留水平，結果如表2所示。 Bio inert系統(tǒng)新增多種自動進樣器清洗方式，通過增加針清洗和閥清洗等方式殘留可降至0.1%以內。
表2 生物惰性Frontier Bio Inert 不同進樣器清洗程序儀器殘留對比表（以峰面積計算）
將適量寡核苷酸（ASO）用處理后的大鼠血清上清液稀釋成濃度為1.0ng/mL，5.0ng/mL，10.0ng/mL，50.0ng/mL，100.0ng/mL，200ng/mL，500ng/mL的標準工作液分別進樣分析。寡核苷酸線性結果如圖4所示，在1.0ng/mL~500ng/mL范圍內線性良好，r2均大于0.999。
圖6 寡核苷酸（ASO）的標準曲線結果
將100ng/mL的寡核苷酸（ASO）樣品連續(xù)進樣6次進行重復性考察。保留時間重復性在0.24%-0.26%之間，峰面積重復性在0.84%-1.30%之間。（圖7-圖10）。
圖7 寡核苷酸ASO（ID-1）100ng/mL連續(xù)6針重復性結果表
圖8 寡核苷酸ASO（ID-2）100ng/mL連續(xù)6針重復性結果表
圖9 寡核苷酸ASO（ID-3）100ng/mL連續(xù)6針重復性結果表
圖10 寡核苷酸ASO（ID-4）100ng/mL連續(xù)6針重復性結果表
本方案采用科諾美生物惰性超高效液相色譜系統(tǒng)Frontier Bio Inert LC，該系統(tǒng)與質譜儀聯(lián)用，采用新的自動進樣器清洗方式，有效降低寡核苷酸非特異性吸附，線性最高點500ng/mL后空白殘留在0.1%以內，在濃度范圍1ng/mL-500ng/mL內線性良好，線性相關系數(shù)大于0.999，重復性好，滿足寡核苷酸藥物的精準測定。
免責聲明
手機版
制藥網(wǎng)手機版
制藥網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：zyzhan
直播中 
直播中 
直播中 
简阳市|
罗平县|
盖州市|
洛南县|
交城县|
建阳市|
长白|
西城区|
定日县|
象山县|
汝城县|
明水县|
淄博市|
阳春市|
宜川县|
阳曲县|
垣曲县|
乌鲁木齐市|
民勤县|
云和县|
南充市|
镇安县|
江安县|
宣恩县|
鄱阳县|
门源|
甘德县|
和林格尔县|
新民市|
望谟县|
鸡东县|
甘泉县|
沁水县|
临桂县|
潞城市|
民权县|
靖远县|
松滋市|
嵩明县|
措美县|
额尔古纳市|