elisa預實驗中常用的預處理方法有哪些

　　ELISA預實驗的預處理分為?樣本預處理?和?微孔板預處理?兩類，不同類型樣本的處理方法存在差異，具體如下，可參考：

　　一、樣本預處理

　　1. 血清樣本

　　采集后室溫放置2小時(或4℃過夜)自然凝固，隨后在2-8℃條件下以?1000×g離心20分鐘?分離血清;立即檢測則收集上清直接使用，若需保存需分裝后凍存于-20℃或-80℃，避免反復凍融。

　　重點注意：嚴格避免溶血，溶血會釋放過氧化物酶活性物質引發(fā)非特異性顯色，影響結果準確性。

　　2. 血漿樣本

　　采用含抗凝劑的采血管采集血液，采集后30分鐘內(nèi)，在2-8℃條件下以?1000×g離心15分鐘?，收集上清后即可使用;不立即檢測則分裝凍存，同樣避免反復凍融。

　　重點注意：不同試劑盒對抗凝劑有特殊要求，處理前需仔細閱讀試劑盒說明書。

　　3. 細胞相關樣本

　　細胞培養(yǎng)上清：?1500 rpm離心10分鐘(4℃)?去除細胞碎片，收集上清后即可檢測，凍存保存需分裝避免反復凍融。

　　細胞裂解液：用預冷PBS洗滌細胞3次，重懸后反復凍融裂解細胞，再在2-8℃條件下以?1500×g離心10分鐘?，收集上清即可。

　　4. 組織勻漿樣本

　　用預冷PBS沖洗去除表面殘留血液，稱重后剪碎組織，按?1:9的重量體積比?(1g組織對應9mL預冷PBS)加入液體，冰浴下充分勻漿;可進一步超聲破碎或反復凍融裂解細胞，隨后在2-8℃條件下以?5000×g離心5分鐘?，收集上清備用，全程冰上操作減少蛋白降解。

　　5. 其他常見樣本

　　尿液/腦脊液：無菌容器收集后，?1000×g離心15分鐘(2-8℃)?去除雜質，取上清即可檢測。

　　糞便：用PBS重懸后冰上振蕩15分鐘，?5000×g離心5分鐘?取上清即可。

　　6. 高濃度樣本特殊預處理

　　若預估樣本濃度較高，預實驗需做梯度稀釋處理：

　　稀釋原則：將濃度降至試劑盒線性檢測范圍，推薦用含1% BSA的PBS緩沖液作為稀釋液減少基質干擾。

　　梯度設計：低濃度樣本做1:2、1:5、1:10梯度;高濃度樣本做1:10、1:50、1:200大跨度梯度，確定OD值落在標準曲線線性區(qū)的最佳稀釋倍數(shù)。

　　二、預實驗微孔板預處理

　　目前ELISA試劑盒多已預先包被抗體，若自行包被(預實驗摸包被條件)，常規(guī)處理流程為：

　　將包被抗體用包被緩沖液稀釋至工作濃度，每孔加入200μL，37℃孵育4小時;

　　用洗滌緩沖液洗板4次，拍干后即可進行后續(xù)加樣步驟，該流程適用于大多數(shù)TAS-ELISA、DAS-ELISA預實驗體系。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考，具體可咨詢技術老師!

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