黃qu霉素是泛指一些由真菌產(chǎn)生的強(qiáng)毒性致癌類(lèi)物質(zhì)，短期攝入高劑量（1㎎/kg體重）可導(dǎo)致急性中毒，常見(jiàn)發(fā)熱、嘔吐、黃疸等肝功能異常癥狀或肝壞死，長(zhǎng)期低劑量（20微克/千克體重）暴露會(huì)顯著增加肝癌、胃癌等患病風(fēng)險(xiǎn)，因其廣泛存在于農(nóng)作物與食物中，并對(duì)人體和動(dòng)物危害巨大，故而建立快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法對(duì)保障食品安全與公共健康具有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理，即酶聯(lián)免疫法、定量測(cè)定樣品中黃曲霉毒素B1的含量，為食品污染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)儀器

①ST-2000A 霉菌毒素測(cè)定儀

②玉米、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、微量移液器、甲醇、正己烷、二氯甲烷試劑

實(shí)驗(yàn)步驟

①檢查實(shí)驗(yàn)所用器材，確保其干凈干燥無(wú)污染

②甲醇、去離子水以7：3比例配取樣品提取液

③取粉碎玉米樣品2g，放于50ml離心管，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，結(jié)束后取0.5ml上清，加入0.5ml去離子水，混勻

④將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min，搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，并用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

⑤將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。

⑥揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干

⑦每孔加入底物液A（50µl），再加底物液B（50µl），振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

⑧每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

⑨用黃qu霉素測(cè)定儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成

⑩儀器完成測(cè)定，自動(dòng)給出結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)檢測(cè)，該樣品的黃曲霉毒素約為0.19ug/kg，滿(mǎn)足GB 2761-2017標(biāo)準(zhǔn)。

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玉米黃曲霉毒素測(cè)量法

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