利用斑馬魚模型評價(jià)促進(jìn)血管再生作用【評價(jià)原理】

血管新生是指在已有血管結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上長出新血管的生物學(xué)過程，是一個(gè)涉及多種細(xì)胞、基質(zhì)及細(xì)胞因子的復(fù)雜過程。其中血管內(nèi)皮細(xì)胞是循環(huán)血液與血管平滑肌的機(jī)械屏障，在缺血性疾病的治療中，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，重建缺血區(qū)微循環(huán)，促進(jìn)血管新生是重要的治療手段之一。羥甲基戊二酸單酰輔酶還原酶 ( HMGCR) 是他汀類藥物發(fā)揮抑制作用的直接作用點(diǎn), HMGCR功能被抑制會(huì)影響血管的完整性和穩(wěn)定性。斑馬魚在發(fā)育起始階段，存活不依賴血液循環(huán)，不會(huì)像哺乳動(dòng)物那樣由于循環(huán)缺失導(dǎo)致胚胎死亡。因此，可用辛伐他汀誘導(dǎo)斑馬魚血管缺失模型從而篩選血管再生促進(jìn)劑。

運(yùn)用轉(zhuǎn)基因血管內(nèi)皮熒光斑馬魚（呈綠色），血管缺失的斑馬魚腸下血管面積較正常斑馬魚腸下血管面積減小且腸下血管分支變少。由于轉(zhuǎn)基因斑馬魚的特點(diǎn)，血管的變化可以明顯被觀察到。

利用斑馬魚模型評價(jià)促進(jìn)血管再生作用【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和攝入血管再生促進(jìn)劑組。其中正常對照組未攝入辛伐他汀，模型對照組與攝入血管再生促進(jìn)劑組都攝入等量的辛伐他?。ㄐ练ニ⊥ㄟ^溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。攝入血管再生促進(jìn)劑組在攝入辛伐他汀后攝入黃芪甲苷之類的血管再生促進(jìn)劑。

服用一段時(shí)間血管再生促進(jìn)劑后，我們對斑馬魚進(jìn)行熒光拍照，觀察斑馬魚腸下血管面積和腸下血管分支的變化。

【結(jié)果展示】

圖1. 腸下血管面積表型圖

黃色虛線區(qū)域?yàn)榘唏R魚腸下血管面積

可以看到，服用血管再生促進(jìn)劑組腸下血管面積與未攝入辛伐他汀的正常對照組比較相似，沒有明顯的血管缺失。

圖2. 腸下血管分支表型圖

白色箭頭所指為斑馬魚腸下血管分支數(shù)

可以看到，服用血管再生促進(jìn)劑組腸下血管分支與未攝入辛伐他汀的正常對照組比較相似，沒有明顯的血管缺失。

【評價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實(shí)驗(yàn)，服用血管再生促進(jìn)劑的腸下血管面積和血管分支均與正常對照組比較相似，并未模型對照組腸下血管面積縮小、血管分支減少的情況。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了黃芪甲苷具有促進(jìn)血管再生作用。