利用斑馬魚模型評價抗炎作用—神經(jīng)性炎癥【評價原理】

炎癥是免疫系統(tǒng)對組織損傷和感染的一種反應(yīng)，主要特點(diǎn)就是白細(xì)胞（粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）會聚集在感染組織周圍。斑馬魚的免疫系統(tǒng)非常類似于哺乳動物。創(chuàng)傷發(fā)生時，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞對創(chuàng)傷性炎癥幾乎同時作出應(yīng)答，中性粒細(xì)胞遷移速度快，先募集到損傷部位，隨后巨噬細(xì)胞才到達(dá)。數(shù)小時后，炎癥開始消退，巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞離開損傷部位。硫酸銅損傷斑馬魚神經(jīng)丘（斑馬魚體表側(cè)線器的末稍器官），造成神經(jīng)丘細(xì)胞死亡，斑魚的中性粒細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答，聚集在神經(jīng)丘周圍，吞噬死亡的細(xì)胞 。

采用轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞熒光魚（呈綠色），可在熒光顯微鏡在觀察到斑馬魚體表側(cè)線上的中性粒細(xì)胞比正常斑馬魚明顯增多。

利用斑馬魚模型評價抗炎作用—神經(jīng)性炎癥【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和服用抗炎藥組。其中正常對照組未攝入硫酸銅，模型對照組和服用/注射抗炎藥組均攝入硫酸銅（硫酸銅通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用/注射抗炎藥組在攝入硫酸銅之前攝入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和雙氯芬酸之類的抗炎藥。

服用一段時間抗炎藥后，我們觀察斑馬魚體表側(cè)線上的中性粒細(xì)胞數(shù)量，并通過Q-PCR檢測TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎癥相關(guān)因子的表達(dá)。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚體表側(cè)線上中性粒細(xì)胞表型圖

黃色箭頭所指為中性粒細(xì)胞

可以看到，服用/注射抗炎藥組側(cè)線上中性粒細(xì)胞與正常對照組相似，未出現(xiàn)中性粒細(xì)胞募集情況。

以IL-1β基因?yàn)槔?，提供柱狀圖。

圖2. 斑馬魚IL-1β基因相對表達(dá)量

與模型對照組比較，**p < 0.01

可以看到，服用/注射抗炎藥組斑馬魚與模型對照組比較，IL-1β基因表達(dá)明顯下調(diào)。

【評價結(jié)論】

1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實(shí)驗(yàn)，服用抗炎藥組側(cè)線上中性粒細(xì)胞數(shù)量與正常對照組數(shù)量相當(dāng)，未出現(xiàn)模型對照組中性粒細(xì)胞募集情況，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎癥因子明顯下調(diào)。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和雙氯芬酸具有顯著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎癥相關(guān)因子的表達(dá)。