利用斑馬魚模型評價眼毒性

【評價原理】

斑馬魚胚胎視力發(fā)育迅速，受精后發(fā)育4天的幼魚就已經(jīng)依賴視覺線索進(jìn)行捕食和躲避行為。斑馬魚不僅在角膜、晶狀體、脈絡(luò)膜、視網(wǎng)膜以及血管化和神經(jīng)支配等結(jié)構(gòu)上和人類的眼睛有明顯的相似性，而且還有保守的基因表達(dá)、細(xì)胞構(gòu)成和組織結(jié)構(gòu)，因此為研究食品及保健品的眼部毒性提供了一個模型。

我們評價斑馬魚眼毒性有4個指標(biāo)：1.眼睛大??；2.眼部細(xì)胞凋亡；3.眼部血管面積；4.眼部病理切片。

【實驗方案】利用斑馬魚模型評價眼毒性

我們將受測試斑馬魚分成兩組，分別是正常對照組和供試品組，供試品組（保健食品通過溶解到養(yǎng)魚用水中或灌胃的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。

服用一段時間眼保護(hù)劑后，我們在解剖顯微鏡下觀察眼睛大小；整體做凋亡細(xì)胞特異性染色，觀察眼部細(xì)胞凋亡；通過熒光顯微鏡觀察眼部血管面積，同時制作成病理切片觀察眼部的病理結(jié)構(gòu)變化。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚眼睛表型圖

箭頭指示區(qū)域為眼

可以看到，保健食品組眼睛相較于正常對照組明顯減小。

圖2. 斑馬魚眼細(xì)胞凋亡表型圖

黃色虛線區(qū)域為眼，綠色小點為凋亡細(xì)胞

可以看到，保健食品組的凋亡細(xì)胞較正常對照組明顯增多。

圖3. 斑馬魚眼部血管面積

黃色虛線標(biāo)記血管面積

可以看到，保健食品組眼睛血管面積相較于正常對照組明顯增加。

圖4. 眼部凋亡細(xì)胞病理切片

可以看到，保健食品組出現(xiàn)較多的凋亡細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞固縮、染色質(zhì)邊集，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)異于正常對照組。

【評價結(jié)論】

1. 經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對比實驗，保健食品組斑馬魚眼睛明顯變小，凋亡細(xì)胞明顯增多，眼部血管面積明顯增多，在病理切片中出現(xiàn)較多的凋亡細(xì)胞，表現(xiàn)為細(xì)胞固縮、染色質(zhì)邊集，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)異常。

2. 本實驗證實了保健食品的眼毒性。