人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　BS-0279 人B細胞生長因子(BCGF)ELISA試劑盒

　　一、實驗目的

　　本試劑盒用于定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中B細胞生長因子(BCGF)的濃度。

　　二、實驗原理

　　采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。微孔板預包被抗BCGF抗體，樣本中的BCGF與包被抗體結(jié)合后，加入生物素標記的檢測抗體形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的親和素，經(jīng)TMB底物顯色，顏色深淺與樣本中BCGF濃度成正比。

　　三、試劑盒組成

　　預包被酶標板(96孔/48孔)

　　標準品(2700ng/L)

　　標準品稀釋液

　　生物素標記抗體

　　酶結(jié)合物(HRP標記)

　　顯色底物A/B液

　　終止液

　　20×濃縮洗滌液

　　封板膜

　　說明書

　　四、操作步驟

　　1. 試劑準備

　　將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)30分鐘

　　濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍備用

　　2. 標準品稀釋

　　取6個EP管，每管加150μL標準品稀釋液

　　首管加入150μL標準品原液混勻(1800ng/L)

　　依次倍比稀釋至2.5ng/L

　　3. 加樣

　　設空白孔(僅加稀釋液)、標準孔、樣本孔

　　每孔加100μL標準品/樣本(建議設復孔)

　　37℃孵育90分鐘

　　4. 洗滌

　　甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液350μL

　　靜置30秒后棄去，重復5次

　　拍干(勿用吸水紙直接接觸孔底)

　　5. 酶標反應

　　每孔加100μL生物素標記抗體

　　37℃孵育60分鐘

　　同法洗滌5次

　　6. 顯色反應

　　每孔加底物A/B液各50μL(避光操作)

　　37℃避光孵育15分鐘

　　每孔加終止液50μL終止反應

　　7. 檢測

　　30分鐘內(nèi)用酶標儀測450nm波長OD值

　　繪制標準曲線(OD值 vs 濃度)

　　五、注意事項

　　試劑使用前需平衡至室溫，避免反復凍融

　　不同批號試劑不可混用，有效期前使用

　　加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，推薦使用排槍

　　洗滌需凈，拍干時避免交叉污染

　　顯色劑B液避光保存，終止液有腐蝕性

　　樣本OD值超出標準曲線范圍時需稀釋重測

　　六、結(jié)果計算

　　以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線

　　樣本濃度=標準曲線對應濃度×稀釋倍數(shù)

　　七、性能指標

　　靈敏度：<1號標準品濃度

　　線性范圍：2.5-1800ng/L(R2>0.99)

　　板內(nèi)/板間變異系數(shù)<10%

　　八、樣本要求

　　血清：室溫凝固后離心取上清

　　血漿：EDTA抗凝，避免溶血

　　保存：-20℃可存3個月，避免反復凍融

　　(注：具體操作請以實際試劑盒說明書為準)

　　注：供科研使用，以上資料供參考，不作為實驗依據(jù)，具體請咨詢技術(shù)老師是或品牌商。

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