一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠樣本中的GR蛋白濃度。將抗GR單抗包被于微孔板，加入樣本后形成抗原-抗體復(fù)合物，再與HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合，最終通過TMB底物顯色反應(yīng)定量分析。

　　二、試劑盒組成

　　組分規(guī)格保存條件

　　預(yù)包被微孔板96T/48T2-8℃避光

　　GR標(biāo)準(zhǔn)品6濃度梯度-20℃凍存

　　HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體1瓶2-8℃避光

　　TMB底物液A/B各1瓶2-8℃避光

　　注：不同批號(hào)試劑嚴(yán)禁混用

　　三、關(guān)鍵操作步驟

　　樣本處理

　　血清/血漿：離心后取上清，避免溶血

　　組織勻漿：按1:9比例加入裂解液，冰上超聲破碎

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

　　凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用200μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，靜置10分鐘后上下顛倒混勻15次

　　梯度稀釋時(shí)每次稀釋后需短暫離心，避免氣泡產(chǎn)生

　　孵育條件

　　37℃溫育90分鐘(每步加樣后輕拍板邊緣混勻)

　　洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用，每次浸泡時(shí)間≤30秒

　　四、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

　　有效性驗(yàn)證

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.99，最高濃度OD值在2.0-2.4之間

　　復(fù)孔變異系數(shù)(CV%)應(yīng)<15%

　　濃度計(jì)算

　　樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線20%-80%范圍內(nèi)時(shí)可直接計(jì)算

　　超出范圍需重新稀釋(建議梯度稀釋1:5/1:10/1:20)

　　五、常見問題解決方案

　　現(xiàn)象可能原因處理措施

　　全板不顯色漏加HRP酶標(biāo)抗體檢查加樣順序并重做^^4^^

　　背景值過高洗滌不充分增加洗滌次數(shù)至5次^^3^^

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線非線性標(biāo)準(zhǔn)品溶解不均復(fù)溶后延長離心時(shí)間^^4^^

　　注意：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

　　天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。