人γ氨基丁酸(GABA)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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　　以下是?人γ-氨基丁酸(GABA)ELISA試劑盒?的實驗使用說明，綜合整理自不同廠商的試劑盒說明書及操作指南：

　　一、實驗原理?

　　競爭法?：樣本中的GABA與HRP標(biāo)記的GABA抗原競爭結(jié)合包被在微孔板上的抗體，顯色強度與GABA含量呈負(fù)相關(guān)?。

　　雙抗體夾心法?：包被抗體與樣本中的GABA結(jié)合后，再加入酶標(biāo)抗體形成復(fù)合物，顯色強度與GABA濃度呈正相關(guān)?。

　　二、樣本處理要求?

　　血清/血漿?：離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)后取上清，避免溶血或脂血?。

　　組織樣本?：勻漿后離心取上清，建議用PBS(pH7.4)稀釋?。

　　尿液/細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接離心后檢測，避免反復(fù)凍融?。

　　注意事項?：含NaN3的樣本會抑制HRP活性，需避免使用?。

　　三、操作步驟(以雙抗體夾心法為例)?

　　加樣?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品(50μL)，樣本孔先加稀釋液40μL，再加樣本10μL?。

　　孵育?：37℃溫育60分鐘，洗滌5次(每孔加滿洗滌液，靜置30秒后拍干)?。

　　加酶標(biāo)抗體?：每孔加入HRP標(biāo)記抗體100μL，37℃孵育60分鐘?。

　　顯色?：加入TMB底物A/B各50μL，37℃避光顯色15分鐘?。

　　終止與檢測?：加終止液50μL，15分鐘內(nèi)測定450nm處OD值?。

　　四、結(jié)果計算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度通過曲線擬合計算?。

　　若樣本OD值超出線性范圍，需用稀釋液稀釋后重測?。

　　五、注意事項?

　　試劑盒需2-8℃保存，使用前室溫平衡20分鐘?。

　　濃縮洗滌液若有結(jié)晶，需水浴加熱溶解后再稀釋使用?。

　　不同批號試劑組分不可混用?。

　　注：以上資料僅供參考，如需具體的完整說明，可參考品牌供應(yīng)商或咨詢技術(shù)老師。

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