小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）檢測ELISA試劑盒操作步驟

結(jié)合ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題、封板膜使用等相關(guān)信息，以下是小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）檢測ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟，全程適配科研實(shí)驗(yàn)場景：

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

試劑與樣本預(yù)處理?

試劑盒從2-8℃冰箱取出，室溫平衡20-30分鐘，20×濃縮洗滌液按1:20比例用蒸餾水稀釋備用。

血清/血漿樣本采集后30分鐘內(nèi)1000g離心20分鐘，取上清，避免反復(fù)凍融，溶血樣本不可使用。

標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液溶解，倍比稀釋成5個(gè)以上梯度濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

器材準(zhǔn)備?

提前準(zhǔn)備450nm波長酶標(biāo)儀、高精度移液器、37℃恒溫箱、蒸餾水等器材。本生BUNSEN

二、正式操作流程

加樣?

設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。

除空白孔外，每孔加入HRP標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，避免蒸發(fā)和污染。

溫育?

將酶標(biāo)板放入37℃恒溫箱，溫育60分鐘，保證抗原抗體充分結(jié)合。

洗板?

揭掉封板膜，棄去孔內(nèi)液體，拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復(fù)洗板5次，最后在吸水紙上拍干。

顯色?

每孔依次加入顯色劑A 50μL、顯色劑B 50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

終止與讀數(shù)?

每孔加入終止液50μL，此時(shí)藍(lán)色反應(yīng)液立即轉(zhuǎn)為黃色。本生BUNSEN

以空白孔調(diào)零，加終止液后15分鐘內(nèi)，在450nm波長下依次測定各孔的吸光度（OD值）。

三、結(jié)果計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為縱坐標(biāo)，對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到直線回歸方程。

將待測樣本的OD值代入回歸方程，計(jì)算出對應(yīng)樣本中小鼠BMP-2的實(shí)際濃度。

四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

所有標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔建議設(shè)置復(fù)孔，每次實(shí)驗(yàn)同步繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，保證結(jié)果重復(fù)性。

洗滌步驟是核心，洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致背景偏高、OD值異常升高，可適當(dāng)增加洗板次數(shù)降低誤差。

本試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn)，不可用于臨床診斷用途。

注：以上科研產(chǎn)品資料僅供參考！

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