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Elisa實(shí)驗(yàn):競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體的原理
以下是ELISA競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗體的原理詳解:
一、核心原理?
競(jìng)爭(zhēng)法的核心在于?抗原-抗體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合?,其反應(yīng)機(jī)制為:
固相抗原?:預(yù)先包被在酶標(biāo)板上的抗原作為固定結(jié)合位點(diǎn)?
競(jìng)爭(zhēng)過(guò)程?:
樣本中的待測(cè)抗體(未標(biāo)記)與酶標(biāo)抗體(標(biāo)記抗體)同時(shí)與固定抗原結(jié)合
待測(cè)抗體濃度越高,結(jié)合的酶標(biāo)抗體越少,顯色越弱(顯色強(qiáng)度與待測(cè)抗體濃度成反比)?

二、關(guān)鍵步驟?
固相抗原包被?:將抗原固定于酶標(biāo)板孔內(nèi)?
競(jìng)爭(zhēng)孵育?:加入樣本(含待測(cè)抗體)與酶標(biāo)抗體混合液,孵育后形成競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合?
顯色檢測(cè)?:
結(jié)合的酶標(biāo)抗體催化底物顯色
顏色越深,說(shuō)明待測(cè)抗體越少;顏色越淺,待測(cè)抗體越多?
三、結(jié)果判讀要點(diǎn)?
現(xiàn)象? ?解釋? ?示例?
樣本孔顯色深 待測(cè)抗體少,酶標(biāo)抗體結(jié)合多 陰性樣本
樣本孔顯色淺 待測(cè)抗體多,酶標(biāo)抗體結(jié)合少 陽(yáng)性樣本
四、與夾心法的區(qū)別?
競(jìng)爭(zhēng)法?:顯色強(qiáng)度與待測(cè)物濃度?成反比?,適用于小分子抗原或抗體檢測(cè)?
夾心法?:顯色強(qiáng)度與待測(cè)物濃度?成正比?,適用于大分子抗原檢測(cè)?
以上原理綜合了抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制與顯色反比關(guān)系,適用于抗體定量檢測(cè)場(chǎng)景。
注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù),具體產(chǎn)品資料請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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