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 一、實驗室平行反應器的原理

實驗室平行反應器是一種用于多個反應體系同時進行反應的設(shè)備，其原理是通過多個反應器同時進行反應，從而提高反應效率。該設(shè)備通常由多個反應器、溫度控制系統(tǒng)、攪拌系統(tǒng)和反應物加入系統(tǒng)等部分組成。其中，多個反應器可以同時進行不同反應體系的反應，溫度控制系統(tǒng)可以控制反應體系的溫度，攪拌系統(tǒng)可以保證反應體系達到均勻混合，反應物加入系統(tǒng)可以保證反應物按照一定比例加入反應體系中。

 

二、實驗室平行反應器的應用

實驗室平行反應器廣泛應用于化學反應、催化反應、生物反應等領(lǐng)域。其主要優(yōu)勢在于可以同時進行多個反應體系的反應，從而提高反應效率，降低實驗成本。此外，實驗室平行反應器還可以用于反應條件的優(yōu)化和反應體系的篩選，為化學研究提供了更多可能性。 在化學研究中，實驗室平行反應器可以用于新化合物的合成、反應條件的優(yōu)化、催化劑的篩選等方面。在生物研究中，實驗室平行反應器可以用于藥物篩選、酶催化反應等方面?？傊瑢嶒炇移叫蟹磻魇腔瘜W實驗室中不的實驗設(shè)備之一，其應用在化學和生物領(lǐng)域都具有廣泛的前景。

三、實驗室平行反應器的實驗分析

平行罐的攪拌控制

 

500mL四聯(lián)平行罐攪拌控制特性曲線

反應器的供氧能力尤為重要，體積氧傳遞系數(shù)(KLa)與攪拌轉(zhuǎn)速、槳葉形狀密切相關(guān)，因此反應器攪拌參數(shù)的穩(wěn)定控制尤為重要。

設(shè)置不同轉(zhuǎn)速的參數(shù)進行測試，在線攪拌轉(zhuǎn)速用上位機軟件進行在線采集，同時用測速表進行實際轉(zhuǎn)速的測定。在長期攪拌工作的情況下，比較了4 個反應器之間的轉(zhuǎn)速差異，分析攪拌控制的平行性，4 個罐的攪拌轉(zhuǎn)速均在不同設(shè)定值下持續(xù)穩(wěn)定工作，4 個反應器之間攪拌控制的差異較小，為后續(xù)的平行性培養(yǎng)提供基礎(chǔ)條件。

平行罐的溫度控制

500mL四聯(lián)平行罐溫度控制特性曲線

微生物的生長及代謝狀態(tài)與所處環(huán)境溫度密切關(guān)聯(lián)，系統(tǒng)精確的控溫功能及實現(xiàn)控制的平行能力是評價發(fā)酵反應器平行化培養(yǎng)的一個重要指標。

設(shè)定溫度參數(shù)后，溫度控制系統(tǒng)可以快速使溫度穩(wěn)定在設(shè)定值，該反應器在測試溫度范圍內(nèi)的控溫性能較好。經(jīng)計算，25.0℃ ~ 40.0℃的6個控溫點最大偏差為2.0%，在5.0% 的偏差需求內(nèi)。

通過500mL 平行罐系統(tǒng)中A、B、C、D 單元罐間的溫度控制平行性比較，實驗使用最小顯著差異t 檢驗(Least Significant DifferencetTest，LSD-t)，P < 0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義，平行性較好。

 

500mL四聯(lián)平行罐溫度控制參數(shù)

平行罐關(guān)聯(lián)溶解氧的通氣量控制

500mL四聯(lián)平行罐關(guān)聯(lián)DO的通氣流量控制曲線

平行反應器保持穩(wěn)定的溶解氧(DO)范圍值取決于精密的氣路控制模塊。檢測了氣體質(zhì)量流量控制系統(tǒng)(MFC)，設(shè)定不同的空氣和氧氣流量值，并調(diào)節(jié)罐壓使其穩(wěn)定在相同值。比較其測控精度的情況及4個罐組單元之間流量控制系統(tǒng)的平行性，4 個罐之間的通氣流量控制差異采用LSD-t 檢驗計算分析，經(jīng)計算，不同通氣流量控制點的最大偏差為2.6%，通氣流量控制系統(tǒng)較好，對四聯(lián)罐之間的通氣流量控制平行性進行LSD(當P<0.05.差異顯著)比較分析，四聯(lián)罐單元間的通氣流量控制不存在顯著性差異，平行性較好。

平行罐的pH控制

500mL四聯(lián)平行罐pH控制曲線

該反應器采用接觸式電化學傳感器來實現(xiàn)反應過程pH 范圍值的控制，配備漢密爾頓智能ARC pH 電極，并可通過特定的通氣策略進行關(guān)聯(lián)。當電極檢測到發(fā)酵液pH 數(shù)值偏離設(shè)定范圍值時，會反饋給上位機控制系統(tǒng)，間接控制補料系統(tǒng)進行自動補堿或補酸。設(shè)定不同的pH 值，檢測該生物反應器的pH 反饋控制系統(tǒng)是否滿足要求，500mL 四聯(lián)生物反應器系統(tǒng)在培養(yǎng)常規(guī)微生物所需的pH 值范圍內(nèi)(pH=5.0~8.0)有較好的反饋控制。

對于生物反應器的供氧能力而言，氧傳遞速率是尤為重要的衡量參數(shù)，OTR=KLa·△ C。其中，KLa 是體積氧傳遞系數(shù);△ C 為氧濃度梯度。生物過程中的OTR 受到生物反應器中流體動力學條件的影響，因生物反應器的類型和規(guī)模而不同。因此，在使用500mL 反應器進行發(fā)酵培養(yǎng)時，反應器的類型和規(guī)模發(fā)生改變，導致流體動力學條件發(fā)生改變，常規(guī)發(fā)酵罐的培養(yǎng)條件并不適用，需調(diào)整發(fā)酵條件參數(shù)，以提高該反應器的供氧能力。

通氣速率、攪拌速度、攪拌槳形狀等都是影響反應器供氧能力的重要因素。調(diào)節(jié)通氣速率和攪拌轉(zhuǎn)速是常用的簡單、有效的供氧調(diào)控手段。

 

平行發(fā)酵罐OTR和流體動力學參數(shù)之間的關(guān)系

平行罐熱膜培養(yǎng)的平行性

使用該反應器對S288C 菌株進行批培養(yǎng)發(fā)酵，分析四聯(lián)罐之間的培養(yǎng)平行性。

在相同培養(yǎng)條件下，菌體在500mL 反應器的A罐、B 罐、C 罐和D 罐中細胞代謝呈現(xiàn)了較一致的趨勢，四聯(lián)罐不同的反應器之間平行性良好。耗糖速率、菌體量等離線參數(shù)結(jié)合在線參數(shù)定量分析，在指數(shù)生長期，有關(guān)代謝參數(shù)的變化呈現(xiàn)了與菌體生長相關(guān)關(guān)系。在整個發(fā)酵過程中不改變通氣量的情況下，菌體在一次生長階段主要進行無氧發(fā)酵，表現(xiàn)出細胞干重(Dry Cell Weight，DCW)和CER 的同步上升(見圖11)，此階段氧氣利用較少、DO 波動較小，當葡萄糖耗盡一次發(fā)酵停止進入平臺期，CER 急劇降低。當經(jīng)過短暫的平臺適應期后，菌體開始進行二次發(fā)酵，表現(xiàn)出DCW 和CER 的二次上升。對比分析可以看出，在4 個罐中底物碳源消耗速率相近，且發(fā)酵周期變化相同，宏觀參數(shù)線性關(guān)系良好，表現(xiàn)出較好的平行性。

 

 

500mL平行罐中菌種發(fā)酵培養(yǎng)宏觀參數(shù)

結(jié)語

隨著生物醫(yī)藥研究及應用的迅猛發(fā)展，亟需工藝測驗生物反應器平臺，用來彌合基因及細胞工程菌株的可用性與培養(yǎng)過程條件下菌株代謝特性定量表征之間的差距，實現(xiàn)菌株生理代謝特性的快速定量表征和培養(yǎng)工藝優(yōu)化。本文對自主研發(fā)的500mL 四聯(lián)平行生物反應器系統(tǒng)進行了綜合評價和供氧能力的改進優(yōu)化，為后續(xù)實現(xiàn)微生物菌族及細胞株的代謝特性參數(shù)分析奠定了基礎(chǔ)。

在500mL 四聯(lián)生物反應器冷模參數(shù)控制實驗下，對其性能進行分析與評價，經(jīng)比較計算500mL 平行罐的pH、溫度、轉(zhuǎn)速、通氣率控制模塊在不同的參數(shù)設(shè)置點的最大偏差均在5% 的偏差要求內(nèi)。經(jīng)LSD-t 參數(shù)化檢驗計算，4 個反應罐單元之間不存在顯著差異，反應器冷模參數(shù)控制滿足控制要求且整體平行性較好。

菌株在500mL 生物反應器的實驗結(jié)果有較好重復性和平行性，可以準確表征菌體發(fā)酵過程中的宏觀特性參數(shù)。從傳統(tǒng)的單元操作到系統(tǒng)化工程，從宏觀到微觀，當前所做的研究就是要與各高技術(shù)領(lǐng)域互相滲透融合，形成邊緣技術(shù)科學。隨著生物技術(shù)研究的深入發(fā)展，如何從工程學的角度進行深入探索，從宏觀的經(jīng)驗描述到微觀的本質(zhì)認識，為構(gòu)建宏觀與微觀相結(jié)合的工藝測試分析平臺打下良好的基礎(chǔ)，這對于過程工藝優(yōu)化和放大具有重要意義。