離心超濾管是否可以重復(fù)使用
離心超濾管是否可以重復(fù)使用
離心超濾管通常不需要預(yù)處理即可使用(也有人說用蒸餾水洗一次會(huì)好些),不過對(duì)于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附zui小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會(huì)有問題。非特異結(jié)合的程度隨著個(gè)別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。對(duì)超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率,因?yàn)槿芤嚎商顫M膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預(yù)先用zui高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時(shí)以上,蒸餾水*沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以*除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。常用的鈍化溶液可選擇:
1、1%牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液
2、離心超濾管5%十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液
3、5%Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液
4、5%Triton-X 蒸餾水溶液
5、5%聚乙二醇化合物蒸餾水溶液
6、1%免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
離心超濾管因?yàn)樾枰咚匐x心,某些對(duì)剪切力或壓力誘導(dǎo)下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜容易堵,對(duì)于有微小顆粒或者碎片的樣品,能先用較大孔徑的離心超濾管過濾一次,再進(jìn)行下一步濃縮。
離心超濾管是否可以重復(fù)使用:
離心超濾管通常不能消毒一次性使用。由于單管價(jià)格并不便宜,不少人嘗試重復(fù)使用----經(jīng)驗(yàn)是用蒸餾水清洗膜表面多次,離心一次到兩次,那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次,會(huì)好些??芍貜?fù)用于同一樣品,不用時(shí)可用蒸餾水浸泡,但是要防止細(xì)菌污染。不同樣品就不要混用了。有人說泡在20%酒精、1N的NaOH(*)中,防止長菌,而且防干,只要超濾膜侵了水,就不可以再讓它干,但也有人說會(huì)破壞膜結(jié)構(gòu)。離心超濾管反正廠家一般不支持重復(fù)用。多次重復(fù)使用會(huì)堵塞濾膜上的孔徑,甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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