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更換細(xì)胞培養(yǎng)基需要觀察哪些指標(biāo)？
無論是原代培養(yǎng)還是細(xì)胞系的傳代培養(yǎng)，一旦培養(yǎng)開始，就要定期更換或補(bǔ)充細(xì)胞培養(yǎng)基。如果細(xì)胞持續(xù)增殖，隨后遲早要進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對干不增殖的培養(yǎng)物，也需要定期更換培養(yǎng)基，因?yàn)榧?xì)胞仍會代謝，培養(yǎng)基的某些成分會耗盡或自然降解，產(chǎn)生的代謝廢物也需要通過換液去除。
細(xì)胞傳代間隔在不同細(xì)胞系中因生長速率和新陳代謝的不同而不同。快速生長的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，如HeLa細(xì)胞系，通常每周傳代一次，四天后換液。生長緩慢的細(xì)胞系，特別是非轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，可能每兩周、三周甚至四周傳代一次，兩次傳代之間每周換液。
有四個(gè)指標(biāo)表示需要更換細(xì)胞培養(yǎng)基：
一、pH降低時(shí)
pH降低，要考慮pH降低的速率和確切值。當(dāng)pH從7.0降至6.5，大多數(shù)細(xì)胞停止生長；在pH6.5和6.0之間，細(xì)胞開始失去活性。如果細(xì)胞培養(yǎng)基從紅色變成橙色，再變成黃色，那么需要更換細(xì)胞培養(yǎng)基。盡量估計(jì)pH降低的速率；如果pH為7.0的培養(yǎng)物每天降低0.1pH單位，那么在換液前多放置一兩天沒什么傷害，但若培養(yǎng)物每天降低0.4pH單位，則需在24～48h內(nèi)換液，不可不換液而放置過周末。
二、細(xì)胞濃度
細(xì)胞濃度，細(xì)胞以高濃度培養(yǎng)比以低濃度培養(yǎng)更快地消耗細(xì)胞培養(yǎng)基，pH變化速率能夠證明這一點(diǎn)。但也不總是如此，部分代謝較快的細(xì)胞密度低時(shí)也很容易使細(xì)胞培養(yǎng)基很快變黃，也有代謝慢的細(xì)胞密度非常高了可能才會變黃。
三、細(xì)胞類型
細(xì)胞類型，正常細(xì)胞（例如二倍體成纖維細(xì)胞）通常在高密度時(shí)停止分裂，這一現(xiàn)象是由于細(xì)胞擁擠，生長因子耗盡及其他一些因素造成的。細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，即使放置2～3周甚至更長時(shí)間，細(xì)胞也很少變性。然而，轉(zhuǎn)化細(xì)胞、連續(xù)細(xì)胞系以及一些胚胎細(xì)胞在細(xì)胞密度過高時(shí)迅速變性，除非每天換液或傳代。
四、形態(tài)衰退
形態(tài)衰退，這點(diǎn)需通過定期觀察和熟悉細(xì)胞系來預(yù)計(jì)。如果任其退化發(fā)展下去，它將成為不可逆的，細(xì)胞將會進(jìn)入凋亡。
