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技術(shù)革新 提質(zhì)增效 | 一個流動相條件完成蛋白,mRNA和AAV的聚體分析

發(fā)布時間:2025-5-27
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  SurePac Bio 550 SEC MDI革新技術(shù)  
 
  1 Monodisperse(單分散顆粒):
 
  均一的3µm單分散硅膠顆粒技術(shù),優(yōu)異的孔徑分布,降低了色譜分離中擴散效應(yīng)的影響。
 
  2 Inert technology(惰性技術(shù)):
 
  先進的填料包裹技術(shù),屏蔽了離子交換位點,最小化非特異性結(jié)合,生物惰性的硬件,在降低了非特異性結(jié)合的同時能夠兼容MS,CAD,MALS等檢測器。
 
  3 High-Reproducitivity(高重現(xiàn))
 
  精準(zhǔn)控制色譜柱填料的裝填,更高的質(zhì)控放行標(biāo)準(zhǔn),在保證高柱效的同時,實現(xiàn)了優(yōu)異的批間一致性。
 
  4 High-Throughout(高通量)
 
  4.6mm X 150mm的柱子同時兼容HPLC和UHPLC系統(tǒng),可以實現(xiàn)7分鐘完成一個樣品的分析。
 
  技術(shù)革新-蛋白分析不同流動相條件結(jié)果對比  
 
不同鹽濃度下蛋白分離對比圖
 
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不同比例有機溶劑下蛋白對比譜圖
 
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  先進的填料包裹技術(shù),屏蔽了離子交換位點,最小化非特異性結(jié)合,生物惰性的不銹鋼SurePac Bio 550 SEC MDI色譜柱,降低了蛋白與色譜柱的非特異性結(jié)合,如圖(1)所示在pH6.8條件下,改變鹽濃度對500kDa 蛋白分離的影響。高濃度的氯化鈉稍能提升聚體與單體的分離度,緩沖液濃度在20-50 mmol/L之間,聚體與主峰的分離度差別不大。如圖(2)所示在50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl(pH6.8)體系中,比較加入0-15%不同比例乙腈對蛋白樣品分離的影響,本實驗中發(fā)現(xiàn)色譜柱與該樣品基本沒有疏水性吸附,在不加乙腈的體系中聚體和主峰的分離度以及聚體的峰高峰谷比最優(yōu)。實驗結(jié)果說明SurePac Bio550 SEC MDi色譜柱與該蛋白之間的離子性吸附和疏水性吸附非常低,在不加乙腈的體系中就可以將聚體和蛋白分離地比較好。
 
50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl(pH6.8)條件下分析mRNA的結(jié)果
 
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50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl(pH6.8)條件下熒光檢測器下分析AAV的結(jié)果
 
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50 mmol/LNaH2PO4+300 mmol/L NaCl(pH6.8)條件下UV檢測器下分析AAV的結(jié)果
 
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  如圖(2)(3)(4)(5)所示,SurePac Bio 550 SEC MDi 色譜柱在15分鐘內(nèi)實現(xiàn)了500 kDa 蛋白,mRNA和AAV9單體和聚體的較好分離。樣品與色譜柱之間的離子性吸附和疏水性吸附都比較低,在一個相同的色譜流動相體系中,同時完成三類樣品的聚體和單體分析。生物兼容Vanquish Flex液相系統(tǒng)下,該色譜柱分離不同滴度的AAV9,紫外檢測器和熒光檢測器下都未觀察到殘留。
 

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