電霧式檢測器—吐溫定性定量的得力工具
聚山梨醇酯(Polysorbates，商品名吐溫)，作為一類非離子表面活性劑，具有優(yōu)異的乳化、增溶和分散性能。近年來，隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的迅猛發(fā)展，特別是在單克隆抗體、疫苗和重組蛋白藥物等高端制劑的快速增長，吐溫作為關(guān)鍵輔料廣泛應(yīng)用于各種藥物制劑的開發(fā)和生產(chǎn)中。
然而，吐溫的分析檢測面臨顯著挑戰(zhàn)。由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)缺乏發(fā)色團(tuán)，難以通過傳統(tǒng)的紫外檢測器(UV)實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確測定。此外，吐溫作為混合物，含有游離脂肪酸、聚乙二醇或氧化降解產(chǎn)物等雜質(zhì)，可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集、免疫原性增強(qiáng)甚至藥物失效，直接威脅患者安全。因此迫切需要高效、靈敏的分析方法來監(jiān)控吐溫的質(zhì)量，以滿足監(jiān)管機(jī)構(gòu)(如FDA、EMA)和藥典日益嚴(yán)格的要求。
賽默飛電霧式檢測器(Charged Aerosol Detector, CAD)作為一款創(chuàng)新性的通用型檢測器，可對吐溫中的酯、酸和雜質(zhì)等非揮發(fā)性或半揮發(fā)性物質(zhì)提供高靈敏的響應(yīng)。
在此背景下，2025年2月，賽默飛(Thermo Fisher Scientific)的應(yīng)用團(tuán)隊和研發(fā)團(tuán)隊在色譜與分離科學(xué)領(lǐng)域的頂級期刊《Journal of Chromatography A》上發(fā)表了題為“A review of polysorbate quantification and its degradation analysis by liquid chromatography coupled with charged aerosol detection”的綜述文章[1]。作為學(xué)術(shù)界公認(rèn)的高影響力期刊(最新影響因子約為3.8)，《Journal of Chromatography A》為該領(lǐng)域的前沿研究提供了重要平臺。這篇綜述的發(fā)表恰逢其時，回應(yīng)了醫(yī)藥行業(yè)對吐溫分析技術(shù)升級的迫切需求。
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吐溫定量
由于吐溫缺乏發(fā)色團(tuán)，使用紫外(UV)檢測器檢測吐溫較為困難，CAD提供高靈敏度、非揮發(fā)性物質(zhì)的均一響應(yīng)和寬線性范圍，使其成為定量分析多種輔料的便捷有效方法，在吐溫檢測和定量分析中將發(fā)揮越來越重要的作用。
● 合適的梯度洗脫程序可以將吐溫組分洗脫為單一峰，在提高方法靈敏度的同時，有助于配方開發(fā)、兼容性驗證、穩(wěn)定性測試和質(zhì)量控制
● 與UV和ELSD檢測器相比，CAD提供了更低的檢測限(LOD)和定量限(LOQ)，同時避免了HPLC-UV和HPLC-FMA等方法需要衍生化以提供可檢測信號，可能引入人為錯誤并且耗時等缺點(diǎn)
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吐溫成分剖析
工業(yè)生產(chǎn)的吐溫成分復(fù)雜，因此剖析吐溫組成對分析產(chǎn)品穩(wěn)定性、研究降解機(jī)制和解釋不溶性顆粒形成的原因等至關(guān)重要。
● 中心切割-二維液相色譜技術(shù):對于含有蛋白質(zhì)和輔料的復(fù)雜基質(zhì)樣品，2DLC-CAD-MS方案可以同時實(shí)現(xiàn)在線樣品凈化、蛋白質(zhì)去除和 吐溫分離與解析
● 反梯度補(bǔ)償技術(shù):利用Vanquish Duo-CAD系統(tǒng)，結(jié)合反梯度補(bǔ)償功能，可以消除流動相組成對響應(yīng)的影響，提高響應(yīng)一致性和定量分析精度
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吐溫降解研究
吐溫在藥物配方中的降解會導(dǎo)致關(guān)鍵功能特性的變化，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的劣化和不穩(wěn)定。因此，了解吐溫降解的原因?qū)τ跍p少蛋白質(zhì)配方中注射試劑的安全風(fēng)險至關(guān)重要。
● 蛋白質(zhì)、緩沖液等引起的降解：HPLC-CAD/MS作為一種*的分析方法，用于深入探索吐溫降解及其機(jī)制
● 降解研究對吐溫存儲條件的指導(dǎo)作用：針對吐溫活性官能團(tuán)引起的降解，可針對性的采取避光、低溫、調(diào)節(jié)pH，酶抑制和氧化預(yù)防等手段避免吐溫降解
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總結(jié)與展望
文章系統(tǒng)總結(jié)了高效液相色譜結(jié)合電霧式檢測器(HPLC-CAD)在吐溫定性與定量分析中的廣泛應(yīng)用與最新進(jìn)展，重點(diǎn)聚焦于吐溫的組成分析、降解原因研究及其反應(yīng)機(jī)理的探討。研究不僅展示了CAD在檢測吐溫及其非揮發(fā)性降解產(chǎn)物(如酯類、酸類)時的高靈敏度和通用性，還深入剖析了降解路徑(如過氧化物生成和酯鍵斷裂)，為吐溫生產(chǎn)中的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。這一工作旨在推動吐溫分析技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化，助力開發(fā)更穩(wěn)定、安全的蛋白質(zhì)制劑，應(yīng)對生物醫(yī)藥領(lǐng)域日益增長的質(zhì)量挑戰(zhàn)。
參考文獻(xiàn)：
[1] L. Shi, G. Shen, R. Chai, P.H. Gamache, Y. Jin, A review of polysorbate quantification and its degradation analysis by liquid chromatography coupled with charged aerosol detection, Journal of Chromatography A, 1742 (2025) 465651.
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