液相色譜的基本工作原理是基于樣品中各組分在固定相和流動(dòng)相之間分配系數(shù)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。當(dāng)混合樣品被注入液相色譜系統(tǒng)后，會(huì)隨著流動(dòng)相(如水、甲醇、乙腈等液態(tài)溶劑)進(jìn)入裝有固定相(如硅膠、化學(xué)鍵合相、聚合物等多孔顆粒材料)的色譜柱。由于不同組分與固定相之間的相互作用力(如吸附、分配、排阻、親和等)存在差異，它們?cè)诠潭ㄏ嘀械臏魰r(shí)間也就各不相同。具體來(lái)說(shuō)，那些與固定相相互作用較弱的組分，隨流動(dòng)相移動(dòng)的速度較快，會(huì)先流出色譜柱；而與固定相結(jié)合緊密的組分，則移動(dòng)速度較慢，后流出色譜柱。通過(guò)這一過(guò)程，混合物中的各組分得以逐一分離。此外，分離效果不僅取決于溶質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)差異(熱力學(xué)因素)，還受到擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度、柱填充情況以及流動(dòng)相流速等動(dòng)力學(xué)因素的影響。
 

　　液相色譜的使用注意事項(xiàng)：
 

　　1.流動(dòng)相選擇與處理
 

　　-應(yīng)選擇HPLC級(jí)或更高級(jí)別溶劑，水需用二次蒸餾水或超純水，且現(xiàn)配現(xiàn)用，防止微生物滋生污染系統(tǒng)。
 

　　-流動(dòng)相配制后需恢復(fù)至室溫再使用，避免溫差導(dǎo)致性能不穩(wěn)定。
 

　　-使用緩沖鹽溶液時(shí)，必須過(guò)濾，并在使用前后用純水清洗流路，禁止將緩沖鹽溶液留在流路中靜置。同時(shí)，色譜柱需先用低比例有機(jī)相(有機(jī)相含量不低于5)沖洗，再用高比例有機(jī)相保存，避免緩沖鹽析出。盡量避免使用高濃度磷酸緩沖鹽(>10mmol/L)。
 

　　-盡量避免使用純乙腈作為流動(dòng)相，以防乙腈聚合引起吸不上液。非用不可時(shí)建議使用棕色瓶存放。
 

　　2.操作規(guī)范
 

　　-高壓管路連接處禁止在帶壓狀態(tài)下拆卸。
 

　　-調(diào)整流速時(shí)要謹(jǐn)慎，避免壓力和溫度的急劇變化，防止沖擊柱內(nèi)填料。
 

　　-更改檢測(cè)樣品溶液的溶劑組成時(shí)應(yīng)逐步進(jìn)行，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接將有機(jī)溶劑替換為純水，或反之。
 

　　-紫外檢測(cè)器燈源關(guān)閉后需冷卻30分鐘再關(guān)機(jī)。
 

　　3.安全維護(hù)
 

　　-廢液需分類(lèi)收集，有機(jī)廢液不得直接排放。
 

　　-定期對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，如清洗進(jìn)樣針、更換密封墊等。