液相色譜能夠處理成分復雜、極性差異大或穩(wěn)定性低的混合物。通過選擇合適的固定相和流動相梯度，它可以實現(xiàn)對高沸點、大分子、熱不穩(wěn)定物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多糖、農(nóng)藥殘留)的有效分離，且無需高溫加熱，避免了物質(zhì)分解的問題。結(jié)合了高精度進樣系統(tǒng)和高靈敏度檢測器(如紫外檢測器、熒光檢測器、質(zhì)譜檢測器等)，能夠滿足痕量物質(zhì)(濃度低至μg/L甚至ng/L級別)的檢測需求。在定性分析方面，通過保留時間和特征光譜或質(zhì)譜圖的雙重驗證，可以準確識別物質(zhì)成分；在定量分析方面，采用外標法、內(nèi)標法等成熟方法，能實現(xiàn)物質(zhì)濃度的準確計算。
 

　　液相色譜法以液體為流動相，由于液體流經(jīng)色譜柱時受到的阻力較大，因此需要對載液施加高壓(一般可達150～35000KPa)，以確保流動相能夠迅速通過色譜柱。同時，流動相在柱內(nèi)的流速也較經(jīng)典液相色譜快得多(一般可達1～10mL/min)，從而大大縮短了分析時間。已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。例如，熒光檢測器的靈敏度可達10g級別，而且用樣量小，一般只需幾個微升。
 

　　與氣相色譜法相比，液相色譜法不受試樣揮發(fā)性的限制，能夠分析高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大(大于400以上)的有機物。這些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75～80，原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離和分析。通常配備有自動化進樣系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理軟件，使得操作過程更加簡便快捷，降低了人工誤差的風險。

 

　　液相色譜的測定步驟：
 

　　1.樣品預處理
 

　　-提取：稱取試樣約10g(準確至0.1g)于100ml錐形瓶中，加入60ml混合提取液和2g氯化鈉，振蕩30min。經(jīng)濾孔為80-120μm的過濾漏斗抽濾，殘渣用3×10ml混合提取液洗滌。合并濾液和洗液于250ml燒杯中。在沸水中加熱30min，取下，于3000r/min離心20min，置4℃冰箱中冷卻20min，然后經(jīng)濾孔為40～80μm的過濾漏斗抽濾，收集濾液。
 

　　-凈化：若樣品成分復雜，可采用固相萃取等方法進一步凈化。
 

　　-濃縮定容：將提取液用氮吹儀濃縮至近干，用甲醇定容至適當體積，過0.22μm微孔濾膜后待測。
 

　　2.儀器準備
 

　　-流動相配制：選擇HPLC級或更高級別的溶劑，按比例配制流動相，并用0.22μm濾膜過濾，使用時蓋好帶排氣孔的瓶蓋。
 

　　-色譜柱安裝：將色譜柱正確安裝在柱溫箱中，連接好管路，確保無泄漏。
 

　　-系統(tǒng)平衡：用流動相沖洗系統(tǒng)至少30分鐘，直至基線穩(wěn)定。
 

　　3.進樣分析
 

　　-樣品裝載：將樣品溶液注入進樣環(huán)，注意避免氣泡產(chǎn)生。
 

　　-數(shù)據(jù)采集：啟動色譜工作站，開始采集數(shù)據(jù)，記錄色譜圖。
 

　　4.數(shù)據(jù)處理
 

　　-定性定量：根據(jù)保留時間定性，采用外標法或內(nèi)標法定量。
 

　　-結(jié)果報告：計算樣品中目標化合物的含量，并出具檢測報告。