高效液相色譜在蛋白質(zhì)分離純化中的應用

發(fā)布時間：2022-4-19

　　高效液相色譜又叫高壓、高速、近代液相色譜，通常叫做高效液相色譜。它是60年代中期才建立的一種高效快速分離化合物的方法，到了70年代后期才廣泛用于蛋白質(zhì)的分離純化方面，現(xiàn)已成為分離純化蛋白質(zhì)非常有效的方法之一。

　　高效液相色譜儀是高效液相色譜的專用儀器，有很多種類，從類型看分為綜合型高效液相色譜儀和專用型儀器，從功能上分為分析型、制備型、分析和制備兼用型。

　　具有以下優(yōu)勢：

　　1、分辯率高。一根長10cm的色譜柱可分離十幾種以上的物質(zhì)；

　　2、靈敏度高。HPLC現(xiàn)已廣泛采用多種高靈敏度的檢測器，如紫外、熒光、電導等。

　　3、HPLC分離、純化蛋白質(zhì)的速度快。通常半小時左右可進行一次，大大縮短了純化蛋白質(zhì)的時間；

　　4、重復性好，在作分析蛋白質(zhì)分析試驗時，誤差一般不超過5%。

　　5、適應面廣，靈活性強，幾乎所有的蛋白質(zhì)根據(jù)它們的性質(zhì)差別（等電點、疏水性、分子量、電荷分布等）都可以用不同HPLC方法進行分離提純；

　　高效液相色譜HPLC使用前期準備工作：

　　1、室內(nèi)溫度始終保持恒定，因為室溫的變化對高效液相色譜檢測器有影響。

　　2、始終保持高效液相色譜儀器包括內(nèi)在系統(tǒng)的清潔。

　　3、最好提前準備好備用電源防止停電。

　　4、所有溶液、試劑、樣品、標準溶液、注射劑等都應事先準備好。

　　因此，HPLC在蛋白質(zhì)分離純化方面具有重要的位置。

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