產品名稱：FlashPfu DNA 聚合酶

英文名稱：FlashPfu DNA Polymerase

FlashPfu DNA 聚合酶價格產品規(guī)格：

FlashPfu DNA 聚合酶價格產品描述：FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通過融合特殊持進能力增強因子與精心改造過的pfu DNA聚合酶，是來源于超嗜熱古細菌的DNA聚合酶。該酶具有5'→3' 聚合酶活力, 3'→5' 核酸外切酶活力，并產生平頭末端產物。由于其具有高效的3'→5' 核酸外切酶活力（校正活力），使得PCR能獲得很好的保真性，FlashPfu DNA聚合酶的錯配率約為Taq DNA聚合酶的1/50。FlashPfu DNA聚合酶的zui快延伸速率可達5−6 kb/min，對于復雜模板也可達到2 kb/min。

特點與應用：

1、高保真PCR——保真性為Taq DNA聚合酶的50倍

2、快速PCR——延伸速度15−30 s/kb

3、長片段PCR——基因組DNA ≤ 19 kb，λ DNA ≤ 30kb

4、生成用于平頭末端克隆的PCR產物

5、定點突變

活力單位定義：75°C、30分鐘內使10 nmol的dNTP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為1個活性單位（U）。

儲存條件：儲存于-20℃。

注意事項：

1、請等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)*溶解后再配制PCR反應體系。

2、為了獲得的擴增效果，擴增前的所有操作請在冰上進行。在室溫下，聚合酶活力可能會產生非特異性擴增。并且請將FlashPfu DNA Polymerasezui后加入反應體系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力導致引物降解。

3、本產品擴增產物的克隆請按照平頭末端克隆方法操作。

4、引物設計：

1）引物Tm值計算請使用zui鄰近法。請不要使用其他計算方法，它們計算得到的Tm值偏低，不適合本產品。

2）引物長度控制在20−35堿基，并且Tm > 60°C。

3）引物的GC含量盡量控制在40−60%。

4）在引物3’端以G或C結尾，可提高引物和模板結合效率。但是要避免3’端避免有多個G或C，防止非特異性結合。

5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6）正、反向引物的3’端避免相互互補。

7）擴增長片段時，引物長度控制在25−35堿基。

8）進行定點突變時，請將錯配堿基靠近5’端。若錯配堿基靠近3’端，可能會受本酶校正。

不要使用含有尿嘧啶和次黃嘌呤核苷的引物。

應用舉例：對于復雜模板的極限延伸速度

步驟1. 按下表所示，在50 µl PCR體系中加入100  ng人基因組：

步驟2. 設置PCR程序：

延伸時間:

X= 1 min (10 s/kb)

1.5 min (15 s/kb)

2 min (20 s/kb)

3 min (30 s/kb)

該案例中所用的引物：

6 kb β-globin target

FP: ACAAGGGCTACTGGTTGCCGATTTTTATTG

RP: GGGACTGGCCTCAGAGGAAACTTCAGG

案例結果電泳圖：