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同科生物FlashPfu 高保真DNA 聚合酶通過(guò)融合特殊持進(jìn)能力增強(qiáng)因子與精心改造過(guò)的pfu DNA聚合酶，是來(lái)源于超嗜熱古細(xì)菌的DNA聚合酶。下面小編為大家介紹一下FlashPfu DNA 聚合酶注意事項(xiàng)：

1、請(qǐng)等2× FlashPfu PCR Buffer (with Mg2+)*溶解后再配制PCR反應(yīng)體系。

2、為了獲得較好的擴(kuò)增效果，擴(kuò)增前的所有操作請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行。在室溫下，聚合酶活力可能會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。并且請(qǐng)將FlashPfu DNA Polymerasezui后加入反應(yīng)體系，以避免酶的3’→5’核酸外切酶活力導(dǎo)致引物降解。

3、本產(chǎn)品擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆請(qǐng)按照平頭末端克隆方法操作。

4、引物設(shè)計(jì)：

1）引物Tm值計(jì)算請(qǐng)使用zui鄰近法（Nearest Neighbor method）。請(qǐng)不要使用其他計(jì)算方法，它們計(jì)算得到的Tm值偏低，不適合本產(chǎn)品。

2）引物長(zhǎng)度控制在20−35堿基，并且Tm > 60°C。

3）引物的GC含量控制在40−60%。

4）在引物3’端以G或C結(jié)尾，可提高引物和模板結(jié)合效率。但是要避免3’端避免有多個(gè)G或C，防止非特異性結(jié)合。

5）正、反引物的Tm之差不要大于5°C。

6）正、反向引物的3’端避免相互互補(bǔ)。

7）擴(kuò)增長(zhǎng)片段時(shí)，引物長(zhǎng)度控制在25−35堿基。

8）進(jìn)行定點(diǎn)突變時(shí)，請(qǐng)將錯(cuò)配堿基靠近5’端。若錯(cuò)配堿基靠近3’端，可能會(huì)受本酶校正。

不要使用含有尿嘧啶和次黃嘌呤核苷的引物。