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2015-12-23
轉(zhuǎn)化效率是感受態(tài)細胞的一項評價指標,下文即感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化效率的檢驗方法.
為確定 感受態(tài)細胞 的轉(zhuǎn)化效率,可將一定量的完整 質(zhì)粒 轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞中,取一部分轉(zhuǎn)化的 細菌 ,涂布到選擇培養(yǎng)基上,可用菌落生長單位/μg DNA ,按下面的方法計算感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率.計算公式：轉(zhuǎn)化效率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA的總量.
例如,取1μl(0.1 ng/μl)完整的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化100μl的感受態(tài)細胞. 向轉(zhuǎn)化反應液中加入900μl 培養(yǎng)液 ,讓細菌恢復一小段時間,取100μl鋪板.培養(yǎng)過夜,產(chǎn)生1000個菌落.轉(zhuǎn)化0.1 ng DNA,用SOC稀釋到1000μl后,取1/10涂平板,則涂平板共用0.01 ng DNA 質(zhì)粒,所以轉(zhuǎn)化率＝1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg.
轉(zhuǎn)化效率1×10 6 cfu/μg DNA可滿足普通的亞克隆實驗；1×10 7 cfu/μg DNA用于作更復雜的亞克隆,有*的DNA的轉(zhuǎn)化,T-克隆實驗；構(gòu)建文庫和 突變 要求用的轉(zhuǎn)化的效率為>1×10 8 cfu/μg DNA.
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