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腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測法在早期發(fā)現(xiàn)、病程監(jiān)控、機(jī)制研究、腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后監(jiān)測中應(yīng)用

世界衛(wèi)生組織作出性結(jié)論，癌癥患者如能早期發(fā)現(xiàn)，*可達(dá)80%以上。腫瘤標(biāo)志物可以比影像學(xué)更早的發(fā)現(xiàn)腫瘤，因而對于治療癌癥意義深遠(yuǎn)。腫瘤標(biāo)志物的分泌來源于腫瘤微環(huán)境的基質(zhì)細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞，存在于細(xì)胞、組織或體液中，能用化學(xué)或免疫方法定量證實(shí)腫瘤存在，監(jiān)測腫瘤治療和預(yù)后的物質(zhì)。

圖1：常見腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測方案

目前為止，還沒有找到靈敏度、特異性100%的腫瘤標(biāo)志物。單一指標(biāo)、單一因子的檢測很難準(zhǔn)確的實(shí)現(xiàn)腫瘤早期檢測、病程監(jiān)控及預(yù)后治療效果的評估等。如傳統(tǒng)的Elisa方法，僅能進(jìn)行單一蛋白因子的檢測。若要提高檢測的準(zhǔn)確性和特異性，需要進(jìn)行多個(gè)Elisa實(shí)驗(yàn)檢測不同的蛋白因子。以10個(gè)蛋白因子檢測為例，需要10個(gè)Elisa試劑盒，至少1ml的樣本，一周時(shí)間才能得到結(jié)果。無論從人力、財(cái)力還是時(shí)間和樣本量來說，都不是很好的選擇。而且10個(gè)因子不是同時(shí)檢測也可能造成結(jié)果的誤差。

圖2 檢測對象越豐富疾病區(qū)分度越好（class代表指標(biāo)分類，marker代表具體指標(biāo)）

目前，實(shí)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的zui便捷zui的技術(shù)手段之一就是xMAP技術(shù)。xMAP技術(shù)基于不同熒光編碼的微珠。每一種編碼微珠標(biāo)記一種可捕獲相應(yīng)目標(biāo)分子的抗體，根據(jù)檢測靶標(biāo)的數(shù)量，選擇1-100種標(biāo)記的微珠，混合后與樣品中待測的靶標(biāo)分子作用，然后在液流驅(qū)動下逐個(gè)通過檢測窗口，兩束不同波長激光對每個(gè)微球進(jìn)行檢測，635nm激光檢測微球的色標(biāo)編碼從而確定檢測的靶標(biāo)，532nm激光檢測相應(yīng)靶標(biāo)上的熒光標(biāo)記進(jìn)行定量，通過計(jì)算機(jī)分析和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，直接對每一種目標(biāo)分子進(jìn)行定量。該技術(shù)利用Luminex多功能液相芯片平臺實(shí)現(xiàn)了對蛋白、核酸等靶標(biāo)分子的多重檢測，是*被納入美國臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控的高通量技術(shù)，被譽(yù)為真正的臨床型生物芯片。

圖3 xMAP技術(shù)原理圖

基于xMAP技術(shù)的多重檢測平臺的優(yōu)勢：

- 多重檢測：實(shí)現(xiàn)1-500重因子同時(shí)檢測，為微量樣本的檢測提供技術(shù)保障；

- 高靈敏度：精密的光學(xué)設(shè)計(jì)提升檢測靈敏度，可低至0.04pg/ml；

- 快速/高通量：96/384孔板自動化高通量檢測，每小時(shí)數(shù)據(jù)量可達(dá)9,600個(gè)結(jié)果；

- 微量樣本：僅需10-50ul的樣本量使得跟蹤動物模型的階段性變化成為可能，避免個(gè)體差異帶來的實(shí)驗(yàn)誤差。

目前，已有幾千篇文獻(xiàn)報(bào)道利用xMAP技術(shù)進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測以提高腫瘤檢查準(zhǔn)確性和特異性。例如，Irene等人采用非侵入性方法（血清）對卵巢癌6個(gè)標(biāo)志物進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)6個(gè)標(biāo)志物聯(lián)合診斷比原來的單個(gè)CA-125檢測準(zhǔn)確率明顯提升（95.3% vs 72%）,從而能夠展開卵巢癌的早期治療（圖2）。

圖4：Irene等人卵巢癌早期檢測研究已發(fā)表于Clinic Cancer Research(IF: 8.19)

作為Luminex zui早的合作伙伴，Merck提供包括Luminex儀器、Milliplex高通量多因子檢測試劑盒、Milliplex Analyst 軟件和Biomarker service在內(nèi)的一整套高通量多因子檢測平臺。Merck始終致力于生物標(biāo)志物多重檢測技術(shù)與研發(fā)，擁有三十多年的研發(fā)和服務(wù)經(jīng)驗(yàn)。目前可以提供8個(gè)種屬超過1200個(gè)蛋白因子的檢測，涉及免疫、代謝、腫瘤、神經(jīng)、信號通路、干細(xì)胞等多個(gè)熱門研究領(lǐng)域，能夠滿足多數(shù)腫瘤標(biāo)志物開發(fā)與診斷需求。此外，Merck已與全國各地腫瘤醫(yī)院與研究所合作，提供檢測平臺和服務(wù)，積累了二十年檢測與分析的經(jīng)驗(yàn)，因此開設(shè)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測法應(yīng)用專題，分享成功經(jīng)驗(yàn)給廣大臨床及診斷研究工作者。