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堿性磷酸酶染液說(shuō)明書 （Cell Alkaline Phosphatase Stain）
【檢驗(yàn)原理】
細(xì)胞中堿性磷酸酶（cAKP）在堿性的緩沖液中，催化底物水解，生成物進(jìn)而與一種穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生
成不溶性的偶氮染料，沉著于有cAKP活性的部位。適用于血涂片、骨髓涂片、細(xì)胞涂片或爬片、冰凍切片以及
石蠟切片脫蠟梯度入水后。
【試劑組成】
可染 20～30 張涂片
編號(hào) 試劑組成 外觀
R1 固定液 10ml×1瓶 無(wú)色透明液體
甲液 溶劑5ml×2瓶 無(wú)色透明液體
乙粉 粉劑×2支 白色粉末 R2
丙粉 粉劑×2支 黃色粉末
蘇木素染液 5ml×1瓶 紫紅色液體
R3
甲基綠5ml×1 瓶 綠色液體
本所附贈(zèng)疏水膜1張。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
本試劑盒應(yīng)置室溫密封保存，有效期6個(gè)月。
【試劑配制】
〇 底物應(yīng)用液的配制：臨用時(shí)將 1 支乙粉劑倒入 1 支甲溶劑中，用微量移液器取少許液體打入小離心管中，
反復(fù)顛倒離心管，再用微量移液器將離心管中的液體轉(zhuǎn)移到瓶中，如此反復(fù)2～3次，使二者充分混合，完
全溶解后才可加入1支丙粉劑，再充分搖動(dòng)使其*溶解，配成底物應(yīng)用液待用。底物應(yīng)用液要新鮮配制，
用多少配多少。
【操作步驟】
① 固定：新鮮血涂片、骨髓涂片、細(xì)胞涂片或爬片、冰凍切片以及石蠟切片用固定液固定3 min左右。 （石
蠟切片脫蠟梯度入水后不需固定）
② 加底物應(yīng)用液：固定后的樣本，滴加新鮮配制的底物應(yīng)用液蓋滿樣本部分，加蓋疏水膜，放置濕盒中，
避光37℃孵育 15min，水洗。（此時(shí)覆蓋在樣本上的疏水膜會(huì)遇水掉下）
③ 復(fù)染：趁濕用復(fù)染液(蘇木素或者甲基綠，兩者取其一)染3min左右。水洗，鏡檢。
【染色結(jié)果】
血涂片及骨髓涂片的觀察： 選涂片中厚薄均勻的部位滴加香柏油用油鏡檢查，燈光適中。細(xì)胞核呈紫色， cAKP
陽(yáng)性者胞漿中出現(xiàn)紅至紅棕色顆粒，有些為棕褐色或咖啡色顆粒，其強(qiáng)度可按Kaplow記分法表示。
0 胞漿內(nèi)無(wú)紅色或無(wú)咖啡色；
1 彌散的紅色并偶見紅色或咖啡色顆粒；
2 彌散的紅色，有中等量的紅棕色顆粒；
3 顯著的紅色，有較多的紅棕色或咖啡色顆粒；
4 顯著的紅色并有粗大的紅棕色或咖啡色、深咖啡色顆粒充滿胞漿。
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