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蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法代測詳解-齊一生物

2020-9-1  閱讀(6710)

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氨基酸是含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位,是構(gòu)成動物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。是含有堿性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質(zhì)的氨基酸均為α-氨基酸。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法測定原理:
大多數(shù)蛋氨酸(甲硫氨酸)本身不能發(fā)射熒光,又不具有紫外吸收的特性,需要制成某初中形式的衍生物后才能檢測。本說明書中運用蛋氨酸(甲硫氨酸)與 PITC 柱前衍生,紫外檢測器 254nm 波長下檢測 。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法 試劑的組成和配制: 
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法實驗前的準備工作:
蛋氨酸(甲硫氨酸)的提取:
(1)游離蛋氨酸(甲硫氨酸)的提?。?br />(2)結(jié)合態(tài)蛋氨酸(甲硫氨酸)提取:
蛋氨酸(甲硫氨酸)的衍生:
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量測定操作步驟:
1、 開啟電腦、檢測器和泵,安裝上色譜柱,打開軟件,在方法組中設置進樣量,設置完畢保存方法組。
2、 用流動相過柱子,待基線穩(wěn)定后開始加樣。
3、 加入標準品,分離蛋氨酸(甲硫氨酸),(柱子不同,保留時間有差異)。
4、 加入樣品 ,在相應保留時間處檢測蛋氨酸(甲硫氨酸)的峰面積。
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法含量的計算:
樣本溶液中各種蛋氨酸(甲硫氨酸)濃度(ug/mL)=f1/f2*C F1=樣本溶液中個蛋氨酸(甲硫氨酸)峰面積/內(nèi)標峰面積
F2=混合蛋氨酸(甲硫氨酸)標準品溶液中各蛋氨酸(甲硫氨酸)峰面積/內(nèi)標峰面積  C=混合蛋氨酸(甲硫氨酸)標準品中個蛋氨酸(甲硫氨酸)濃度
蛋氨酸(甲硫氨酸)含量高效液相色譜法注意事項:
1、 為了避免使用過程中柱壓變化過大,流速由小到大調(diào)節(jié)。
2、 使用完畢后,需用純乙腈沖洗柱子 30min,防止無機鹽結(jié)晶堵塞色譜柱。
3、 在儀器操作過程中,要時刻注意柱壓的變化,防止柱壓過高,損害儀器。

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