久久亚洲精品天码av,午夜福利屄插穴,午夜福利视频91,亚欧美爽爽爽爽爽,亚洲欧美日韩色色图片,青青操在线观看,精品天堂麻豆av,无码av东京热,婷婷成人亚洲少妇

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)方法原理 先用組織學(xué)完整的新鮮人肝癌組織接種于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤組織再接種于裸鼠肝內(nèi)，建立肝原位移植瘤模型（間接肝原位移植瘤模型），并將其與直接肝原位移植瘤模型、皮下移植瘤模型和腹腔內(nèi)移植瘤模型作比較。
實(shí)驗(yàn)材料 NC裸鼠 Balb c裸鼠
試劑、試劑盒 肝癌外科手術(shù)切除標(biāo)本 Hanks液 戊*鈉 甲醛 石蠟
儀器、耗材 針頭 光學(xué)顯微鏡 手術(shù)刀 剪刀 紗布 消毒液 口罩
人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟 ：
一、間接肝原位移植瘤模型的制備　
1. 用新鮮的肝癌外科手術(shù)切除標(biāo)本（來自長(zhǎng)海醫(yī)院，患者為1名47歲男性，病理診斷：肝左葉肝細(xì)胞癌，粗梁型，Ⅱ級(jí)），在Hanks液中，去除壞死組織和非癌組織后切成1～2 mm3小塊。
2. 取2塊瘤組織，在離體40 min內(nèi)用粗針頭植入裸鼠腰背部皮下，待皮下移植瘤長(zhǎng)到直徑約1 cm時(shí)切取腫瘤，在Hanks液中，去除壞死組織后切成1～2 mm3小塊，裸鼠用戊*鈉腹腔麻醉后，行左上腹橫切口，暴露肝臟。
3. 取上述2塊瘤組織，在離體40 min內(nèi)用粗針頭植入裸鼠肝右葉深部實(shí)質(zhì)內(nèi)，全層關(guān)腹。
二、直接肝原位移植瘤模型的制備　
1. 同一例新鮮肝癌手術(shù)切除標(biāo)本，處理方法同皮下移植，裸鼠處理同間接肝原位移植，取2塊瘤組織，在離體40 min內(nèi)用粗針頭直接植入裸鼠肝右葉深部實(shí)質(zhì)內(nèi)。
2. 皮下移植瘤模型和腹腔內(nèi)移植瘤模型的制備。
三、人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤ELISA試劑盒病理檢查和相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)
1. 解剖和組織學(xué)檢查　
（1）所有裸鼠接種后，分組分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食，每天觀察1～2次。
（2）當(dāng)裸鼠處于全身衰竭狀態(tài)時(shí)處死并作大體解剖，對(duì)接種瘤和轉(zhuǎn)移瘤分別進(jìn)行觀察、測(cè)量，記錄腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移情況，重要器官（主要為肝和肺）經(jīng)10%中性甲醛固定后，常規(guī)石蠟制片，光學(xué)顯微鏡檢查。
2. 周圍血甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)　
處死前，均采用摘眼球采血的方法獲得血液，用生化法檢測(cè)AFP的分泌量。
3. 瘤細(xì)胞DNA含量分析　
留取部分移植瘤標(biāo)本采用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行DNA含量分析。
其他
一、人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)討論：
目前，肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是其術(shù)后長(zhǎng)期存活的主要障礙。為了研究腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制，建立接近于人體的腫瘤動(dòng)物模型顯得尤為重要。早期建立的動(dòng)物移植瘤模型，移植瘤雖能維持來源腫瘤的組織結(jié)構(gòu)和生化特性，但很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而影響了它在研究人類腫瘤轉(zhuǎn)移特性方面的價(jià)值。進(jìn)一步研究表明，人癌在宿主體內(nèi)表達(dá)侵襲轉(zhuǎn)移能力，不但需要具備合適的移植環(huán)境，而且還依賴于瘤細(xì)胞之間、瘤細(xì)胞與宿主之間的相互作用。
近年來，根據(jù)原位移植理論建立起來的人癌瘤原位移植模型克服了這一缺陷，它不僅維持了原有瘤組織的結(jié)構(gòu)，而且還保持了人體瘤的絕大部分生物學(xué)特性，特別是轉(zhuǎn)移特性，它在宿主體內(nèi)能以類似于患者體內(nèi)的方式顯示其惡性行為。在這一新型模型的啟發(fā)下，人們相繼陸續(xù)建立了人類多種癌瘤的裸鼠原位移植瘤模型，為人類更好地研究腫瘤的轉(zhuǎn)移機(jī)制提供了理想的工具。
Sun等采用組織學(xué)完整的患者肝癌標(biāo)本，在裸鼠體內(nèi)建立了人肝癌原位移植瘤模型LCI-D20，該模型具有很高的自發(fā)轉(zhuǎn)移率，與裸鼠皮下移植瘤模型相比，雖然其組織學(xué)特征相似，但兩者的轉(zhuǎn)移能力卻是截然不同的，肝內(nèi)原位移植瘤自發(fā)轉(zhuǎn)移率達(dá)100％，而皮下移植瘤卻罕見有轉(zhuǎn)移。LCL-D20*不足在于移植瘤存活率低（1/16）。
Yamada 等用來自人肝膽管細(xì)胞癌細(xì)胞株接種裸鼠皮下形成皮下移植瘤和通過脾血管注射形成肝移植瘤，研究亦發(fā)現(xiàn)肝移植瘤轉(zhuǎn)移率明顯高于皮下移植瘤（100% vs 20%）。
Kimura等和Kuo 等研究后亦得出了類似的結(jié)論。我們參照上述實(shí)驗(yàn)方法，并加以改進(jìn)，先建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，然后再接種裸鼠肝內(nèi)建立原位移植模型，其原理是先讓人肝癌組織在裸鼠皮下適應(yīng)裸鼠體內(nèi)環(huán)境，然后再接種于肝臟，從而保證了移植瘤的存活率。研究表明，該模型與直接肝原位移植瘤模型一樣能充分展示人肝癌的生物學(xué)特性，與裸鼠皮下和腹腔移植瘤相比，其侵襲和轉(zhuǎn)移能力均優(yōu)于后者。
為了探討原位與皮下移植腫瘤在腫瘤生物學(xué)行為上產(chǎn)生差異的機(jī)制，可以對(duì)原位與皮下移植瘤分別進(jìn)行p53等癌基因表達(dá)和多種化療藥物治療研究，發(fā)現(xiàn)原位移植瘤p53表達(dá)的強(qiáng)度明顯高于皮下移植瘤，且兩者對(duì)多種化療藥物的敏感性亦是不同的。造成這種差異的原因可能在于腫瘤所處的微環(huán)境不同，從而影響了其生物學(xué)特性的發(fā)揮。
Fukumura 等通過對(duì)裸鼠皮下和肝內(nèi)結(jié)腸癌移植瘤的實(shí)驗(yàn)后得出肝微環(huán)境對(duì)結(jié)腸癌移植瘤的血管形成和微循環(huán)建立的影響與皮下微環(huán)境對(duì)移植瘤的影響是不同的。
Cui 等指出，腫瘤的局部侵襲是發(fā)生轉(zhuǎn)移的前提，只有具備局部侵襲能力的腫瘤才能有轉(zhuǎn)移的能力。皮下和腹腔內(nèi)種植的腫瘤由于受所處部位微環(huán)境的“不良”影響，往往在腫瘤周圍形成纖維包膜，從而限制了腫瘤侵襲周圍組織、淋巴管、血管的能力，所以轉(zhuǎn)移的機(jī)率就大為減少了，而原位移植部位本身就是腫瘤生長(zhǎng)的“土壤”，在這里腫瘤獲得了充分的“滋潤(rùn)”，腫瘤無包膜形成，因而能充分展示其生物學(xué)特性。說明要表達(dá)完整的轉(zhuǎn)移模式必須具備較好的植入環(huán)境，只有原位移植模型才能完整表達(dá)人類癌瘤的轉(zhuǎn)移特性。
移植瘤與原患者肝癌組織之間的形態(tài)學(xué)上的差異，可以認(rèn)為移植的腫瘤組織其形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)只能反映取材部位瘤源的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。此外，移植瘤組織中適應(yīng)裸鼠體內(nèi)環(huán)境的、生長(zhǎng)力強(qiáng)的細(xì)胞群體，可獲得優(yōu)勢(shì)，而弱的則在傳代過程中丟失。晚期，移植瘤由于宿主血供難以維持其生長(zhǎng)需要，腫瘤發(fā)生壞死、出血，宿主也因衰竭而死亡。