人血管生成素2（ANG-2）ELISA 試劑盒

試 劑 組 成

自備物品 1.酶標儀（盡量提前預熱） 2.微量加液器、吸頭 3.蒸餾水或去離子水以及濾紙
操 作 步 驟
1. 取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫（20-25℃）內進行。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入100μl的標準品溶液于空白微孔中。
3. 空白微孔中加入100μl的樣品，空白對照加入100μl的蒸餾水；
4. 在各孔中加入50μl的酶標記溶液；（不含空白對照孔）
5. 將酶標板用封口膠密封后，37℃孵育反應 1小時；（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）
6. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）
7. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干；
8. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；（不含空白對照孔）
9. 20-25℃下避光反應15分鐘；
10. 各孔加入50μl終止液，終止反應；
結 果 判 斷
1. 30分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值； 2. 百分結合率計算：設S0管計數(shù)為B0，各標準管或樣品管計數(shù)為B，非特異管計數(shù)為NSB，則百分結合率計算公式如下：B/ B0=（B－NSB）/（ B0－NSB）×* 3. logit計算:各標準點或樣品管的logit值計算公式如下:logit=ln（B/ B0）/（1－B/ B0）
4. 將標準品的OD均值與標準品0點的OD均相除，為標準點的百分結合率，在log-logit坐標紙上繪圖。
5. Log-logit雙對數(shù)標準曲線：坐標紙上橫軸從左至右*個1-9表示為*個10進位，第二個1-9表示為第二個10進位。第三個1-9表示為第三個10進位。坐標紙縱軸為百分比（1-99），即各標準吸光值的百分結合率。取一條通過各點的直線。要求盡可能多的點在線上，同時剩余的點均勻分布在直線的兩邊。樣品也同樣由吸光值計算百分結合率，再從縱軸上的相應結合率找到直線上的點，此點對應的橫坐標濃度即為樣品的濃度，無須換算。 6. 人工處理：以標準濃度取log值為橫坐標，對應的logit值為縱坐標在普通坐標紙上或以標準濃度為橫坐標，對應的B/B0為縱坐標在logit-log坐標紙上畫出標準曲線（理想化時是一條直線）。根據(jù)待測樣品的B/B0可以從坐標紙上查出樣品的濃度值。如果使用普通坐標紙，查出的數(shù)值應取反對數(shù)才是zui后的濃度值。