試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
1 使用目的：
本試劑盒用于肉類組織（如雞、牛肉和豬肉）中硫酸多粘菌素殘留的定量檢測。
2 實驗原理
本試劑盒采用競爭ELISA 方法，在微孔板包被有硫酸多粘菌素偶聯(lián)抗原，加入硫酸多粘菌素標準品或樣品，游離硫酸多粘菌素與微孔條上預(yù)包被的硫酸多粘菌素偶聯(lián)抗原互相競爭抗硫酸多粘菌素抗體酶標記物，用TMB 底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色，用酶標儀在450nm 波長下進行檢測，吸光值與樣品中硫酸多粘菌素含量成反比，通過標準曲線計算樣品中硫酸多粘菌素的含量。
3 試劑盒組成
3.1 預(yù)包被的硫酸多粘菌素偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1 塊（12 孔×8 條）。
3.2 硫酸多粘菌素標準品：6 瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7
ppb,8.1 ppb。
3.3 抗硫酸多粘菌素抗體酶結(jié)合物：1 瓶（6ml）。
3.4 顯色液A：1 瓶（6ml）。
3.5 顯色液B：1 瓶（6ml）。
3.6 終止液：1 瓶（6ml），2M 硫酸。
3.7 樣本稀釋液：1 瓶（10×, 6ml），用于樣品稀釋用。
3.8 濃縮洗滌液：1 瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9 說明書一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 設(shè)備
4.1.1波長450nm酶標儀。
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當?shù)臑V紙。
4.1.7微量移液器。
4.2 試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2 甲醇。
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2 不要使用過期試劑盒。
2
6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
6.4 標準品中含有硫酸多粘菌素，使用時應(yīng)特別注意，操作時應(yīng)帶手套。
6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結(jié)果。
6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響
實驗結(jié)果。
6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結(jié)果
6.9 混合試劑時應(yīng)避免起泡。
7 工作液準備
7.1 硫酸多粘菌素標準品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb
7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用
7.3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10（1+9）稀釋備用
7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4 反應(yīng)終止液：已備用
8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準確稀釋，否則會出現(xiàn)結(jié)果不準確，樣品應(yīng)當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取100μl處理后的樣品，加入400μl樣本稀釋液
8.5取25μl處理后的樣品，加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）
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