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測(cè)定意義

硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量反映了土壤中硝態(tài)氮的供應(yīng)情況，可作為土壤氮肥的指標(biāo)。測(cè)定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營(yíng)養(yǎng)情況，而且對(duì)鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。

測(cè)定原理

在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測(cè)定計(jì)算得硝態(tài)氮含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

蒸餾水、天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

試劑一：粉劑×2支，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加1.2mL濃硫酸充分溶解。

試劑二：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1支，4℃保存。

樣本處理

按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，期間不斷晃動(dòng)或者置于90℃恒溫?fù)u床中振蕩提取30min，待冷卻后于25℃，12000g離心15min，取上清待測(cè)。（深色植物勻漿后加入約3mg試劑三后再提取）

測(cè)定操作表

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在EP管中如下表加樣

注意：空白管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997

NO3—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總）

                =64.1×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

2. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997

NO3—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）

                =128.2×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1. 試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。

2. 試劑一和試劑二均具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需做好防護(hù)措施。

3. 檢出限為2μg/g。

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