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測(cè)定意義：

果糖是一種最為常見(jiàn)的己酮糖，是葡萄糖的同分異構(gòu)體，以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中，能與葡萄糖結(jié)合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品生產(chǎn)中。

測(cè)定原理：

果糖與間苯二反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在480nm下有特征吸收峰。

所需的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；

試劑一：1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液10mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體 25ml×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體 8ml×1瓶， 4℃避光保存；

試劑四：粉劑0.5g×1瓶，常溫保存。

果糖提取：

稱取0.1~0.2g樣本，常溫研碎；加入0.5mL提取液，適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中；置于80℃水浴鍋中10min（蓋緊，以防止水分散失），振蕩3~5次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清；加入少量（約2mg）試劑四，80℃脫色30min（蓋緊，以防止水分散失）；再加入0.5mL提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測(cè)定。

測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，95℃水浴反應(yīng)30min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定480nm處光吸收值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管分別記為A1、A2和A3?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

果糖含量計(jì)算：

1、果糖含量(mg/mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)管×V1）×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測(cè)定蛋白濃度。

2、果糖含量(mg/g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。

C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.03mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：檢測(cè)限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot

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