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48T人甲肝病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒的試驗步驟

時間:2013/1/4
分享:
  上海撫生實業(yè)有限公司專業(yè)供應ELISA試劑盒,試劑盒,檢測試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,ELISA試劑盒,ELISAKIT,兔子ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,狗ELISA試劑盒,豬ELISA試劑盒,倉鼠ELISA試劑盒,試劑盒,檢測試劑,抗體,細胞株,培養(yǎng)基,腫瘤壞死因子,白介素2,干擾素,標準品,對照品,生物試劑,標志物,抑制因子,抗原,瓊脂,細胞生長因子等。
  
  人甲肝病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒
  
  試驗原理:
  
  HAV-IgG試劑盒是間接法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知HAV-IgG濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將HAV-IgG和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中HAV-IgG的濃度呈比例關系。
  
  自備材料
  
  蒸餾水。
  
  加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
  
  振蕩器及磁力攪拌器等。
  
  安全性
  
  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
  
  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
  
  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
  
  人甲肝病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒
  
  操作注意事項
  
  試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
  
  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
  
  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
  
  使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
  
  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  
  洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
  
  底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
  
  加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
  
  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
  
  人甲肝病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒
  
  樣品收集、處理及保存方法
  
  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
  
  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  
  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  
  組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
  
  保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  
  人甲肝病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒
  
  操作步驟
  
  使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
  
  根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
  
  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
  
  甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  
  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  
  甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
  
  每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  
  取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
  
  在450nm波長處測定各孔的OD值。
  
  局限
  
  6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
  
  試劑盒性能
  
  1.靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
  
  2.特異性:不與其它細胞因子反應。
  
  3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
  
  人甲肝病毒抗體IgGELISA檢測試劑盒
  
  結果判斷與分析
  
  1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
  
  2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的HAV-IgG標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的HAV-IgG含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
  
  3、檢測值范圍:0-40IU/L
  
  4、敏感度:0.1IU/LPatched/PTCH(Patchedproteinhomolog1)Hh信號轉導途徑膜蛋白受體抗體0.2ml
  
  Goatanti-mouseIgG/FITC熒光素標記羊抗小鼠IgG0.3ml
  
  Goatanti-mouseIgM/FITC熒光素標記羊抗小鼠IgM0.3ml
  
  Goatanti-RabbitIgG/FITC熒光素標記羊抗兔IgG0.3ml
  
  Goatanti-RbIgM/FITC熒光素標記羊抗兔IgM0.3ml
  
  CD63/MLA1抗黑色素瘤相關抗原(溶酶體膜糖蛋白)抗體0.2ml
  
  CD66a/CEACAM1癌胚抗原相關細胞粘附分子1抗體0.2ml

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