酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是應(yīng)用廣泛的免疫測(cè)定類型。 ELISA 是一種快速測(cè)試，用于檢測(cè)樣品中抗原或抗體的存在和數(shù)量。小鼠ELISA試劑盒操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)如下：

一、選擇試劑

選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

二、加樣

可能原因：

1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣; 2)手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

解決辦法：

1，標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2，加樣后及時(shí)放入孵箱。

3，加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

4，如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

5，ELISA試劑盒標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。

三、 孵育

可能原因：

1，孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗che底;

2，孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗che底。

解決辦法：

1，貼封片或加蓋;

2，按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。

四、洗板

可能原因：

1，采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。

2，采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不che底;洗板針堵塞，抽吸不wan全;洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。

3，反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。

解決辦法：

1，ELISA試劑盒保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后zui hao在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;

2，合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。