DEAE-纖維素用過的離子交換劑可以反復(fù)使用,使其恢復(fù)原狀的方法俗稱"再生"。再生并非每次用酸、堿反復(fù)處理,通常只要"轉(zhuǎn)型"處理即可。所謂轉(zhuǎn)型就是使交換劑帶上所希望的某種離子,如希望陽離子交換劑帶上NH+4則可用NH4OH浸泡,如希望陰離子交換劑帶上Cl-則用NaCl溶液處理。本實驗中DEAE-纖維素在酸堿處理后,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖溶液浸泡即可轉(zhuǎn)型,以HPO4取代DEAE中的OH-。一般由于DEAE-纖維素使用后因帶有大量雜蛋白,所以再生時,先用0.5mol/L NaOH浸洗,用去離子水洗至pH8左右,再轉(zhuǎn)型,即可再使用。
介質(zhì)使用過后,再生,只有介質(zhì)保存于20%的乙醇中,存放4℃,目的是防止介質(zhì)滋生細菌;稱取IgDEAE32或52,放入5ml量筒中,加蒸餾水浸泡過夜,觀察溶脹后DEAE的體積。
DEAE-纖維素根據(jù)所需層析柱的柱床體積計算所需DEAE的用量,稱取所需DEAE用蒸餾水浸泡過夜,其間換幾次水,每次除去細小顆粒。抽干,改用0.5ml/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用無離子水漂洗,使pH至8左右(用pH試紙檢查)。再改用0.5ml/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用無離子水洗至pH6左右。本實驗中在用前應(yīng)以0.0175mol/L,pH6.7磷酸鹽緩沖液,浸泡平衡后使用。
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