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更新時(shí)間：2018-05-14 09:00:00瀏覽次數(shù)：4850次
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大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA) ELISA試劑盒
| Q008大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA) ELISA試劑盒的詳細(xì)資料： |
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藥品名稱： 通用名：大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的： 本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)含量。 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠 5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)水平。用純化的 大鼠 5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次 加入5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)，再與HRP 標(biāo)記的5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)抗體結(jié)合，形成 抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下 轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 5-羥基吲哚乙酸 (5-HIAA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣 品中人大鼠5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)濃度。 試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(18ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求 1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP )活性。 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo) 準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二 孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl， 混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各 取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混 勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn) 品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl， 濃度分別為12ng/L，8ng/L ，4ng/L，2ng/L， 1ng/L)。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測(cè)樣 品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl (樣 品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此 重復(fù)5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同3。 8. 洗滌：操作同5。 9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止 液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實(shí)際濃度。 注意事項(xiàng) 1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間 控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*使用排槍加樣。 4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請(qǐng)避光保存。 7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。 檢測(cè)范圍： 0.5ng/L -15ng/L 規(guī)格： 96 人份/盒 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 個(gè)月 |
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