在ELISA中，進(jìn)行各項實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的:
包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
小鼠(MIP-2)ELISA Kit
Mouse Macrophage Inflammatory Protein 2,MIP-2 ELISA kit
| 小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠抗IVIgG抗體ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
| 小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒 | 進(jìn)口小鼠ELISA Kit | 48T/96T |
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)去除顆粒。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
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